祛湿解毒方治疗小鼠高尿酸血症:UHPLC-QE-MS整合网络药理学的机制分析OA

背景:祛湿解毒方是基于“湿毒态”病机理论防治高尿酸血症-痛风的临床经验方,具祛湿解毒、舒筋活络之效,但其作用机制尚未明确。目的:探讨祛湿解毒方对高尿酸血症小鼠的治疗作用及骨保护机制。方法:①采用超高效液相色谱-四级杆静电场轨道阱质谱技术确定祛湿解毒方的成分,利用相关数据库查询这些成分对高尿酸血症的作用靶点基因集;通过网络药理学分析获得祛湿解毒方治疗高尿酸血症的潜在核心靶点,对核心靶点进行KEGG富集分析及GO功能分析。②将40只Balb/c小鼠随机分为空白对照组、模型组、别嘌醇组、祛湿解毒方组、别嘌醇祛湿解毒方联用组,每组8只。除空白对照组外,其余4组建立高尿酸血症模型,造模28 d后,空白对照组、模型组灌胃给予羧甲基纤维素钠,别嘌醇组灌胃给予别嘌醇,祛湿解毒方组灌胃给予祛湿解毒方,别嘌醇祛湿解毒方联用组灌胃给予祛湿解毒方与别嘌醇,每天1次,连续给药4周。末次给药6 h后取材,测定血清中尿酸、血清肌酐、血尿素氮、Ⅰ型前胶原氨基端前肽、Ⅰ型胶原羧基端交联端肽、骨钙素水平,苏木精-伊红与天狼猩红染色观察肾组织病理,Micro-CT分析膝关节骨量,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察膝关节破骨细胞数量,免疫荧光染色观察肾脏中p53、葡萄糖转运蛋白9以及膝关节c-JUN表达。Pearson分析Micro-CT参数与c-JUN蛋白荧光强度之间的相关性。结果与结论:①鉴定出了75个祛湿解毒方的有效成分,排名靠前的是姜黄素、槲皮素、芹菜素、大豆异黄酮、染料木素,获得198个预测靶点,核心靶点是TP53、肿瘤坏死因子、白细胞介素6、JUN、白细胞介素1B、核因子κB1,这些核心靶点主要富集在p53、缺氧诱导因子1、核因子kB等信号通路。②血清检测结果显示,祛湿解毒方可降低高尿酸血症小鼠的肾功能指标(尿酸、血清肌酐、血尿素氮)与骨代谢指标(Ⅰ型前胶原氨基端前肽、Ⅰ型胶原羧基端交联端肽)。苏木精-伊红与天狼猩红染色显示,祛湿解毒方对高尿酸血症小鼠肾脏具有保护作用。Micro-CT扫描与抗酒石酸酸性磷酸酶染色显示,祛湿解毒方可提升高尿酸血症小鼠胫骨下骨量、减少膝关节破骨细胞数量。免疫荧光染色显示,祛湿解毒方可降低尿酸血症小鼠肾脏中p53、葡萄糖转运蛋白9表达以及膝关节中c-JUN表达。Pearson分析显示,小鼠膝关节骨小梁分离度与c-JUN蛋白荧光强度呈显著正相关(r>0,P<0.05),骨体积分数、骨小梁数目与c-JUN蛋白荧光强度呈显著负相关(r<0,P<0.05)。③结果表明,祛湿解毒方活性分子共同作用通过调控p53/葡萄糖转运蛋白9对高尿酸血症小鼠发挥降酸、护肾疗效,通过c-JUN/激活蛋白1调控破骨细胞活性缓解高尿酸血症小鼠的骨流失。