通便汤对慢传输型便秘模型大鼠结肠组织VAPB-PTPIP51复合物及Cajal间质细胞自噬的影响OA

目的探讨通便汤治疗慢传输型便秘(STC)的可能作用机制。方法将24只SD大鼠随机分为正常组、模型组、通便汤组及莫沙必利组,每组6只。除正常组以外,其余各组均采用盐酸洛哌丁胺联合生理盐水灌胃法建立STC大鼠模型。造模成功后次日通便汤组大鼠给予通便汤药液18.63 g·kg^(-1)灌胃,莫沙必利组大鼠给予每只1.605 mg·d^(-1)灌胃,正常组和模型组大鼠给予10 ml·kg^(-1)生理盐水灌胃,各组均每日灌胃1次,持续7天。最后一次灌胃24 h后计算各组大鼠粪便颗粒数、粪便含水率;10%活性炭悬溶液灌胃,30 min后计算小肠推进率;ELISA法检测血清中胃泌素(GAS)、胃动素(MTL)浓度;HE染色观察结肠组织病理形态,阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察结肠黏液分泌情况;透射电镜观察结肠组织超微结构;Western Blot法检测结肠组织中干细胞因子受体(C-kit)、干细胞因子(SCF)、自噬相关蛋白5(ATG5)、Beclin1、囊泡相关膜蛋白B(VAPB)、蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用蛋白51(VAPB-PTPIP51)蛋白水平;Real-time PCR法检测结肠组织中C-kit、SCF、ATG5、Beclin1、VAPB、PTPIP51 mRNA水平,免疫组化检测结肠组织中SCF、C-kit、Beclin1、ATG5表达;ELISA法检测结肠组织钙离子(Ca^(2+))含量。结果与正常组比较,模型组大鼠粪便颗粒数、粪便含水率明显下降,小肠推进率降低,血清GAS、MTL浓度降低(P<0.01);肠道杯状细胞数量下降,肠黏膜层、肌层变薄;结肠组织中ATG5、Beclin1 mRNA表达及其蛋白水平明显升高,Ca^(2+)含量降低(P<0.05或P<0.01);电镜显示结肠细胞内空泡样变性,自噬体增多。与模型组比较,通便汤组和莫沙必利组大鼠粪便颗粒数、粪便含水率、小肠推进率增加,血清GAS、MTL浓度升高,结肠组织Ca^(2+)含量升高,Beclin1、ATG5蛋白水平降低(P<0.05或P<0.01);黏膜层厚度及杯状细胞数量显著增加,结肠细胞内自噬体减少;通便汤组ATG5、Beclin1 mRNA表达降低,莫沙必利组SCF、VAPB、PTPIP51 mRNA表达升高,Beclin1 mRNA表达降低(P<0.05或P<0.01)。与莫沙必利组比较,通便汤粪便颗粒数、粪便含水率、血清GAS浓度、结肠组织Ca^(2+)含量、C-kit水平升高,ATG5、Beclin1水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论通便汤可能通过上调线粒体-内质网互作时VAPB-PTPIP51复合物表达,减轻Cajal间质细胞自噬,促进肠道动力,从而改善便秘症状。