胞苷/尿苷单磷酸激酶2调控脂多糖诱导人牙龈成纤维细胞的铁死亡OA

背景:铁死亡是一种铁依赖性细胞程序性死亡,与牙周、种植体周炎症性疾病关系密切,胞苷/尿苷单磷酸激酶2是一种定位于线粒体参与调控组织细胞活化和炎症反应的激酶,二者在种植体周炎中的调控机制尚不清楚。目的:通过脂多糖构建种植体周炎的体外细胞模型,探讨胞苷/尿苷单磷酸激酶2对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞铁死亡的调控机制。方法:(1)采用组织块培养法培养人牙龈成纤维细胞,分别加入0(正常对照组)、10μg/mL脂多糖刺激12 h,通过RT-qPCR和Western blot检测铁死亡相关标志物谷胱甘肽过氧化物酶4、溶质载体家族7成员11和酰基辅酶A合成酶长链家族成员4及胞苷/尿苷单磷酸激酶2的mRNA与蛋白表达,通过活性氧染色及C11-Bodipy染色检测脂质过氧化水平,通过比色法检测细胞内丙二醛、超氧化物歧化酶水平以及还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比率;(2)siRNA沉默胞苷/尿苷单磷酸激酶2,再以10μg/mL脂多糖刺激细胞12 h,检测上述指标的改变。结果与结论:(1)10μg/mL脂多糖刺激人牙龈成纤维细胞12 h后,铁死亡标志物酰基辅酶A合成酶长链家族成员4表达上调,铁死亡负性调控因子谷胱甘肽过氧化物酶4和溶质载体家族7成员11表达下调,活性氧释放增加,丙二醛水平升高,超氧化物歧化酶活性及还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比率降低,胞苷/尿苷单磷酸激酶2表达上调;(2)siRNA沉默胞苷/尿苷单磷酸激酶2后,再以10μg/mL脂多糖刺激细胞12 h,酰基辅酶A合成酶长链家族成员4表达下调,谷胱甘肽过氧化物酶4和溶质载体家族7成员11表达上调,活性氧释放减少,丙二醛水平降低,超氧化物歧化酶活性及还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽比率升高。结果表明,胞苷/尿苷单磷酸激酶2是种植体周炎牙龈成纤维细胞铁死亡的关键调控基因,沉默胞苷/尿苷单磷酸激酶2可抑制脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞铁死亡。