构建大鼠类端粒沉默干扰体1基因RNA干扰慢病毒载体及鉴定OA
背景:类端粒沉默干扰体1是催化组蛋白H3第79位赖氨酸甲基化的关键甲基转移酶,其功能异常与血管重构及多种疾病密切相关。构建稳定的类端粒沉默干扰体1基因RNA干扰慢病毒载体,可为研究类端粒沉默干扰体1在心血管疾病中的生物学功能及相关疾病机制提供有效的实验工具。目的:针对大鼠类端粒沉默干扰体1基因的RNA干扰慢病毒载体构建及鉴定。方法:设计并合成类端粒沉默干扰体1特异性的shRNA序列,将其克隆到慢病毒载体中,经包装、扩增和纯化后获得重组慢病毒。通过Western blot方法鉴定大鼠血管平滑肌细胞中类端粒沉默干扰体1基因表达的干扰效果。结果与结论:实验成功构建了大鼠类端粒沉默干扰体1 RNA干扰慢病毒载体,测得最终获得的重组慢病毒滴度为8×10^(8)PFU/mL。该慢病毒载体能够显著降低血管平滑肌细胞中类端粒沉默干扰体1的蛋白表达水平,可有效沉默类端粒沉默干扰体1基因表达,为进一步研究类端粒沉默干扰体1在大鼠体内的生物学功能提供了可靠工具。
杨子姝;杨简;黄萃园;程陈;吴迪;张静
三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院超声影像科,湖北省宜昌市443003 缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院中心实验室,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院心血管内科,湖北省宜昌市443003缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院中心实验室,湖北省宜昌市443003缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院中心实验室,湖北省宜昌市443003缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院中心实验室,湖北省宜昌市443003缺血性心血管病湖北省重点实验室,湖北省宜昌市443003 湖北省缺血性心血管疾病临床医学研究中心,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院中心实验室,湖北省宜昌市443003 三峡大学第一临床医学院&宜昌市中心人民医院心血管内科,湖北省宜昌市443003
医药卫生
大鼠类端粒沉默干扰体1(DOT1L)RNA干扰慢病毒载体质粒组蛋白修饰心血管疾病293T人胚肾细胞
《中国组织工程研究》 2026 (31)
P.8197-8204,8
国家自然科学基金项目(82170418),项目负责人:张静国家自然科学基金项目(82271618,82471616),项目负责人:杨简湖北省自然科学基金创新群体项目(2022CFA015),项目负责人:杨简湖北省重点研发计划(2023BCB139),项目负责人:杨简湖北省区域科技创新计划项目(2025EIA015),项目负责人:张静湖北省科技创新平台项目(2025CCB016),项目负责人:黄萃园。
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