基于PERK-eIF2α-ATF4通路探讨柔木丹对肝纤维化大鼠的影响OA

目的 本文旨在探讨柔木丹通过蛋白激酶RNA样内质网激酶(protein kinase RNAlike endoplasmic reticulum kinase,PERK)—真核起始因子2α亚基(eukaryotic initiation factor 2 α subunit,eIF2α)—激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)通路发挥抗肝纤维化的可能作用机制。方法 采用随机数字表法将60只雄性SD大鼠分为空白组、模型组、柔木丹低、中、高剂量组和扶正化瘀组,每组10只。自第1周起,除空白组外,剩余5组大鼠腹腔注射四氯化碳混悬溶液建立肝纤维化模型。自第5周起,采用边造模边给药的方式,除空白组和模型组外,扶正化瘀胶囊组按照0.5 g/kg进行灌胃,柔木丹低、中、高剂量组分别按照对应药物量2.65 g/kg、5.3 g/kg、10.6 g/kg灌胃,空白组和模型组用同等剂量的生理盐水代替,持续4周。第8周末取材完成后收集各组大鼠血清,检测血清丙氨酸氨基转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转氨酶(aspartate transaminase,AST);酶联免疫吸附法检测羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)的表达情况;苏木精—伊红、Masson染色观察肝组织病理学变化;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色检测肝组织中ATF4、I型胶原蛋白α1链(collagen type I α 1 chain,COL1A1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达;逆转录实时定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)法检测肝组织中α-SMA和转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1 )的mRNA表达变化;蛋白质印迹法检测肝脏组织中PERK、p-PERK、eIF2α、p-eIF2α、α-SMA的蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组大鼠血清中ALT、AST、HYP水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,柔木丹各剂量组和扶正化瘀组大鼠血清中ALT、AST、HYP水平显著降低(P<0.05)。IHC染色结果表明,与空白组相比,模型组大鼠肝组织中ATF4、COL1A1、α-SMA表达显著升高(P<0.05);与模型组相比,柔木丹各剂量组和扶正化瘀组大鼠肝组织中ATF4、COL1A1、α-SMA表达水平降低(P<0.05),且柔木丹组的治疗作用呈现量效关系。与空白组比较,模型组α-SMA和TGF-β1的mRNA显著升高(P<0.05);与模型组相比,柔木丹各剂量组及扶正化瘀组中α-SMA和TGF-β1的mRNA含量均显著降低(P<0.05),且随着柔木丹剂量的增加大鼠肝组织中α-SMA和TGF-β1的mRNA的表达水平降低越明显。与空白组相比,模型组大鼠肝组织中p-PERK、PERK、p-eIF2α、eIF2α的表达显著增加(P<0.05);与模型组相比,柔木丹各剂量组和扶正化瘀组中p-PERK、PERK、p-eIF2α的表达均明显降低(P<0.05)。结论 柔木丹可能通过下调内质网应激中PERK-eIF2α-ATF4信号通路发挥抗大鼠肝纤维化的作用。