丹星止颤方通过PINK1/Parkin通路调控自噬改善帕金森病小鼠运动功能的机制研究OA

目的 探讨丹星止颤方通过调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/E3泛素连接酶(Parkin)通路治疗帕金森病(PD)的作用及机制。方法 48只C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、美多芭组及丹星止颤方低、中、高剂量组,每组8只。除空白组外,其余各组给予鱼藤酮10 mg/(kg·d)混悬液灌胃,1次/d,连续28 d,构建PD小鼠模型。造模成功后,美多芭组灌胃美多芭混悬液112.5 mg/(kg·d),丹星止颤方低、中、高剂量组分别灌胃丹星止颤方水煎液11.1、22.2、44.4 g/(kg·d),空白组、模型组灌胃等量生理盐水。1次/d,连续灌胃28 d。末次灌胃结束,采用步态实验检测小鼠通过特定距离的时间、最大速度变化率、平均运动速度及单位时间脚步数;旷场实验检测小鼠运动总距离、运动时间、平均速度及穿过总分区次数;爬杆实验检测小鼠转头时间和爬杆时间;尼氏染色观察小鼠中脑黑质区尼氏阳性神经元数量、尼氏阳性神经元平均面积、尼氏小体平均灰度值和积分光密度(IOD);免疫组织化学检测小鼠中脑黑质区α-突触核蛋白(α-syn)阳性表达面积占比及酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞平均面积占比;Western blot检测中脑黑质区α-syn及自噬相关蛋白表达水平。结果 与空白组相比,模型组小鼠通过特定距离的时间延长、最大速度变化率升高、平均运动速度降低、单位时间脚步数减少、运动总距离缩短、平均速度降低、运动时间及穿过总分区次数减少、转头时间和爬杆时间延长(P<0.05),尼氏阳性神经元数量减少、尼氏阳性神经元平均面积缩小、尼氏小体平均灰度值及IOD值降低(P<0.05),α-syn阳性表达面积占比及α-syn蛋白表达水平均升高(P<0.05),TH阳性细胞平均面积占比及Parkin、PINK1、Beclin-1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均降低(P<0.05);与模型组相比,美多芭组及丹星止颤方中、高剂量组小鼠通过特定距离的时间缩短、最大速度变化率降低、平均运动速度升高、单位时间脚步数增加、运动总距离延长、运动时间增加、平均速度升高、穿过总分区次数增加、转头时间和爬杆时间缩短(P<0.05),尼氏阳性神经元数量增加、尼氏阳性神经元平均面积增大、尼氏小体平均灰度值及IOD值升高(P<0.05),α-syn阳性表达面积占比及α-syn蛋白表达水平均降低(P<0.05),TH阳性细胞平均面积占比及Parkin、PINK1、Beclin-1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均升高(P<0.05);与丹星止颤方低剂量组相比,丹星止颤方中剂量组小鼠通过特定距离的时间缩短、最大速度变化率降低、平均运动速度升高、单位时间脚步数增加、运动总距离延长、运动时间增加、平均速度升高、转头时间和爬杆时间缩短(P<0.05),尼氏阳性神经元数量增加、尼氏阳性神经元平均面积增大、尼氏小体平均灰度值及IOD值升高(P<0.05),α-syn阳性表达面积占比及α-syn蛋白表达水平均降低(P<0.05),TH阳性细胞平均面积占比及Parkin、PINK1、Beclin-1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均升高(P<0.05);与丹星止颤方中剂量组相比,丹星止颤方高剂量组小鼠通过特定距离的时间延长、最大速度变化率升高、平均运动速度降低、单位时间脚步数减少、运动总距离缩短、运动时间减少、平均速度降低、转头时间及爬杆时间延长(P<0.05),尼氏阳性神经元数量减少、尼氏小体平均灰度值及IOD值降低(P<0.05),α-syn阳性表达面积占比及α-syn蛋白表达水平均升高(P<0.05),TH阳性细胞平均面积占比及Parkin、PINK1蛋白表达水平、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值均降低(P<0.05)。结论 丹星止颤方立足帕金森病核心病机,以化痰祛瘀、息风止颤为治则,通过调控PINK1/Parkin通路介导的自噬相关过程,减少α-syn异常聚集,保护多巴胺能神经元及黑质区神经元结构完整性,进而改善小鼠运动功能。