黄芩汤通过抑制TXNIP/NLRP3通路恢复溃疡性结肠炎大鼠免疫稳态并抑制结肠细胞凋亡OA

目的 研究黄芩汤对溃疡性结肠炎(UC)大鼠免疫调节及结肠细胞凋亡的影响,并基于硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)通路探讨黄芩汤的药理作用机制。方法 将大鼠随机分为对照(Control)组和造模组,造模组采用肠内注射含有50%乙醇以及5%的2,4,6-三硝基苯磺酸的混合溶液法建立UC大鼠模型,造模完成后随机分为UC组、黄芩汤低剂量组(HQD-L组)、黄芩汤中剂量组(HQD-M组)、黄芩汤高剂量组(HQD-H组)、美沙拉嗪组,每组12只大鼠。HQD-L组、HQD-M组、HQD-H组分别给予5、10、20 g/kg黄芩汤灌胃,美沙拉嗪组给予270 mg/kg美沙拉嗪灌胃,Control组、UC组给予等量生理盐水灌胃。每组给药1次/d,连续21 d。末次给药结束后对大鼠疾病活动指数进行评分;流式细胞仪测定调节性T细胞(Treg)、辅助性T细胞(Th)17比例,并计算Treg/Th17比值;ELISA测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素(IFN)-γ、肿瘤坏死因子(TNF)-α、转化生长因子(TGF)-β1水平和结肠组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察结肠组织病理变化;TUNEL法检查结肠组织细胞凋亡率;RT-qPCR检测TXNIP、NLRP3 mRNA表达水平;Western blot检测TXNIP、NLRP3、半胱天冬酶-3(Caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达水平。结果 与Control组比较,UC组的疾病活动指数评分,Th17比例、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA水平,结肠组织细胞凋亡率,TXNIP和NLRP3 mRNA表达水平及TXNIP、NLRP3、Bax、Caspase-3蛋白表达水平均升高(P<0.05);Treg比例、Treg/Th17比值、IL-4、IL-10、TGF-β1、SOD、GSH-Px、CAT水平及Bcl-2蛋白表达水平均降低(P<0.05)。与UC组比较,HQD-L组、HQD-M组、HQD-H组、美沙拉嗪组的疾病活动指数评分,Th17比例、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA水平,结肠组织细胞凋亡率,TXNIP和NLRP3 mRNA表达水平及TXNIP、NLRP3、Bax、Caspase-3蛋白表达水平均降低(P<0.05);Treg比例、Treg/Th17比值、IL-4、IL-10、TGF-β1、SOD、GSH-Px、CAT水平及Bcl-2蛋白表达水平均升高(P<0.05)。美沙拉嗪组与HQD-L组、HQD-M组比较,Th17比例、IL-1β、IL-6、IFN-γ、TNF-α、MDA水平,TXNIP和NLRP3 mRNA表达水平及蛋白表达水平均降低(P<0.05);与HQD-H组比较上述指标升高(P<0.05)。美沙拉嗪组与HQD-L组、HQD-M组比较,Treg比例、Treg/Th17比值、IL-4、IL-10、TGF-β1、SOD、GSH-Px、CAT水平及Bcl-2蛋白表达水平均升高(P<0.05);与HQD-H组比较上述指标降低(P<0.05)。结论 黄芩汤能调节UC大鼠免疫平衡,抑制炎症反应和氧化损伤,抑制UC疾病进展,降低结肠组织细胞凋亡率,其机制可能与调节TXNIP/NLRP3通路有关。