基于NOX2/ROS通路介导的铁死亡探讨银杏双黄酮对脓毒症大鼠免疫抑制的影响OA

目的从铁死亡角度探讨银杏双黄酮抑制脓毒症大鼠免疫抑制的可能机制。方法将30只大鼠随机分为假手术组、模型组、银杏双黄酮治疗组,每组10只。假手术组大鼠通过在没有结扎和穿刺的情况下分离盲肠来进行假手术;模型组大鼠采用盲肠穿刺结扎法(cecal ligation and puncture,CLP)建立脓毒症大鼠模型;银杏双黄酮治疗组大鼠通过CLP法造模后1 h按体质量腹腔注射银杏双黄酮(50 mg/kg)。手术结束后,通过皮下注射1 mL预热的生理盐水使动物复苏。分别于6、12、18、24 h后,观察各组大鼠的一般情况并记录各组大鼠的生存情况。造模24 h后抗凝管和负压采血针腹主动脉抽取大鼠全血,流式细胞仪检测全血中CD_(4)^(+)T细胞的百分比;免疫磁珠法经脾脏体外分选各组大鼠原代CD_(4)^(+)T细胞,分别采用高通量mRNA测序、流式细胞仪检测各组CD_(4)^(+)T细胞基因表达情况、筛选差异基因及测定ROS、线粒体膜电位荧光水平;采用Western blot法检测NOX2蛋白表达水平。结果假手术组大鼠24 h生存率为100%(10/10),模型组为50%(5/10),银杏双黄酮治疗组为70%(7/10),差异具有统计学意义(P<0.05)。流式检测结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠外周血CD_(4)^(+)T细胞明显耗竭,mRNA测序共得到差异基因748个,其中,铁死亡相关基因CYBB表达水平明显升高;CD_(4)^(+)T细胞中ROS荧光信号明显升高,线粒体膜电位荧光信号明显下降,CYBB基因编码的NOX2蛋白水平表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,银杏双黄酮治疗组大鼠外周血CD_(4)^(+)T细胞耗竭减少,mRNA测序共得到差异基因458个,其中CYBB基因表达水平较模型组明显下降,CD_(4)^(+)T细胞中ROS荧光信号较模型组降低,线粒体膜电位荧光信号较模型组升高,NOX2蛋白水平表达明显降低(P<0.05)。结论银杏双黄酮能够改善CLP脓毒症模型大鼠的生存状态并提高生存率,改善脓毒症大鼠免疫抑制,具体机制可能与抑制NOX2/ROS通路介导的CD_(4)^(+)T细胞铁死亡和线粒体损伤有关。