基于CRISPR-Cas12b技术的登革病毒检测方法的建立OA
Establishment of a dengue virus detection method based on CRISPR-Cas12b
目的 建立一种基于RPA-CRISPR/Cas12b技术的检测登革病毒(DENV)的方法.方法 针对DENV基因保守区域3'-UTR,设计合成RPA引物和sgRNA,筛选最佳的sgRNA和RPA引物,建立RPA-CRISPR/Cas12b检测体系;构建质粒标准品,用不同浓度的质粒评价敏感性;用16份血液样本验证建立的方法.结果 该方法检测DENV质粒的最低限是1 copies/µL;16份血液样本的检测结果与RT-qPCR方法符合率为100％.结论 建立的基于RPA-CRISPR/Cas12b检测DENV的方法简便、快捷,特异性和敏感性均较好,为更快速、更便携地鉴定DENV提供了一种新策略.
This study was aimed at establishing a detection method for dengue virus(DENV)based on RPA-CRISPR/Cas12b tech-nology.We designed and synthesized RPA primers and sgRNAs targeting the conserved 3'-UTR region of the DENV genome,screened for optimal sgRNA and RPA primer combinations,and established the RPA-CRISPR/Cas12b detection system.Plasmid standards were constructed to evaluate sensitivity with varying plasmid concentrations.The established method was validated in 16 blood samples.The re-sults demonstrated a minimum detection limit of 1 copies/µL for DENV plasmid.The results for the 16 blood samples exhibited 100％con-cordance with RT-qPCR results.The established RPA-CRISPR/Cas12b-based DENV detection method is simple and rapid,and it exhib-its favorable specificity and sensitivity,thereby offering a novel strategy for faster,more portable identification of DENV.
马银双;刘静;谢晓霞;李娟娟;杨阳;张富强;张蕾;胡挺松
中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507广州医科大学公共卫生学院,广州 511436暨南大学基础医学与公共卫生学院,广州 510632中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507中国人民解放军南部战区疾病预防控制中心,广州 510507
医药卫生
CRISPR-Cas12b登革病毒检测
CRISPR-Cas12bdengue virusdetection
《中国人兽共患病学报》 2026 (3)
263-268,284,7
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