大别班达病毒核蛋白单克隆抗体制备及其在抗原检测中的应用OA
Preparation of monoclonal antibodies to Dabie bandavirus nucleoprotein and applications in antigen detection
目的 制备大别班达病毒核蛋白单克隆抗体,并筛选可用于双抗体夹心检测的抗体对,为开发该病毒的免疫胶体金、免疫荧光层析及ELISA等抗原检测方法奠定核心试剂基础.方法 利用HEK293悬浮细胞系统表达大别班达病毒重组核蛋白,将纯化后的核蛋白作为抗原免疫Balb/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术制备大别班达病毒核蛋白单克隆抗体,筛选双抗体夹心单克隆抗体对.制备免疫胶体金和荧光免疫层析试纸条,将抗体对进行包被和辣根过氧化物酶标记,向样品垫或反应孔中加入大别班达病毒培养物和核酸阳性血清,验证单克隆抗体对检测大别班达病毒抗原功能.结果 重组核蛋白免疫小鼠后,在小鼠血清稀释度为104时,ELISA反应OD450值为1.38～2.56,血清抗体与抗原反应情况良好;通过杂交瘤细胞培养和筛选,共获得65个单克隆抗体杂交瘤细胞株,最终确定了一对单克隆抗体对,该抗体对在胶体金和荧光免疫层析试纸条,以及ELISA中与大别班达病毒抗原结合,呈现阳性反应.结论 成功筛选出一对大别班达病毒单克隆抗体对,可应用于大别班达病毒抗原的免疫胶体金、荧光免疫层析和ELISA检测.
This study was aimed at developing monoclonal antibodies(mAbs)to the nucleoprotein of Dabie bandavirus and identi-fying a specific mAb pair suitable for sandwich-based antigen detection with immunocolloidal gold,immunofluorescence chromatogra-phy,and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).The recombinant nucleoprotein was expressed in HEK293 suspension cells,purified,and used to immunize BALB/c mice.Hybridoma technology was then used to generate mAbs.After immunization,mouse se-rum at a dilution of 1:10 000 showed strong antigen-antibody reactivity,with ELISA OD450 values ranging from 1.38 to 2.56.Through systematic screening,65 hybridoma cell lines were obtained,and one specific mAb pair with high specificity was successfully identi-fied.This antibody pair demonstrated positive binding to Dabie bandavirus antigen in immunocolloidal gold test strips,fluorescence immunochromatographic strips,and ELISA.The results confirmed the successful development of a practical mAb pair that can be ef-fectively applied for the detection of Dabie bandavirus antigen in multiple immunological assays.
刘荣娇;何方玲;王娟;熊亚茹;湛志飞;李芳彩;蔡亮
湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153湖南省疾病预防控制中心(湖南省预防医学科学院),微生物分子生物学湖南省重点实验室,长沙 410153
医药卫生
大别班达病毒核蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞免疫胶体金免疫层析ELISA
Dabie bandavirusnucleoproteinmonoclonal antibodyhybridomaimmunogoldimmunochromatographyELISA
《中国人兽共患病学报》 2026 (3)
232-236,5
湖南省自然科学基金青年项目(No.2024JJ6265)湖南省卫健委高层次人才支持项目(No.20240304043)湖南省卫健委一般课题(财政资助项目)(No.W20243067)湖南省疾病预防控制中心青荷基金(重点)项目(No.QHJJ2023001) High-level Talent Support Project of Hunan Provincial Health Commission(No.20240304043)The Youth Project of Hunan Natural Science Foundation(No.2024JJ6265)the Hunan Provincial Health Commission General Subject Funding Project(No.W20243067)"Qinghe"Youth Cultivation Fund Project of Hunan Provincial Center for Disease Control and Prevention(No.QHJJ2023001).
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