基于p72、CD2v、MGF360-13L和K196R基因的非洲猪瘟病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立OA
Establishment of a Real-time Fluorescent Quantitative PCR for African Swine Fever Virus Based on p72、CD2v、MGF360-13L and K196R Genes
非洲猪瘟病毒(ASFV)感染给全球养猪业带来重大损失,目前主要靠严格生物安全措施防控,而准确快速的病原检测是关键,但现有核酸检测方法存在诊断指标单一且特异性不足等问题.本研究利用多重RT-qPCR技术,设计引物和探针,构建了可同步检测ASFV的p72、CD2v、MGF360-13L和K196R四个特征基因的四重RT-qPCR检测体系,并优化了反应条件.试验结果显示,该方法的最低检测限为225拷贝/μL重组质粒,且批内及批间变异系数均低于2％,表明建立的方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好的特点,为非洲猪瘟病毒的精准检测提供了有效的技术支持.
African swine fever virus(ASFV)has caused huge losses to the global swine industry.Currently,strict biosecurity measures are the main defense,and accurate and rapid pathogen detection is crucial.However,existing nucleic acid testing methods have problems such as single diagnostic indicators and insufficient specificity.In this study,a quadruple RT-qPCR detection system was constructed using multiplex RT-qPCR technology to simultaneously detect four characteristic genes of ASFV:p72、CD2v、MGF360-13Land K196R,by designing primers and probes and optimizing reaction conditions.The experimental results showed that the lowest detection limit of this method was 225 copies/μL of recombinant plasmid,and the intra-and inter-batch variation coefficients were both below 2％,indicating that the established method has strong specificity,high sensitivity,and good reproducibility,and provides effective technical support for the accurate detection of ASFV.
管大杉;杜付玉;贺安娜;王馨若;苏卯枝;杨鹏;张象涵;窦志强;宁蓬勃
西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071西安电子科技大学机电工程学院,陕西西安 710071西安电子科技大学生命科学技术学院,陕西西安 710071||分子与神经影像教育部工程研究中心,陕西西安 710071
农业科技
非洲猪瘟病毒四重RT-qPCR核酸检测
African swine fever virusQuadruplex RT-qPCRNucleic acid detection
《动物医学进展》 2026 (5)
89-95,7
西安市科技计划项目(21NYYF0013)国家自然科学基金原创探索计划项目(82350124)
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