鲤浮肿病毒灭活组织液的免疫效果OACHSSCD

【目的】评估鲤浮肿病毒(Carp edema virus,CEV)灭活组织液(作为疫苗)对锦鲤(Cyprinus carpio)的免疫保护效果,并探究其激发的免疫应答机制,为鲤浮肿病疫苗的研发提供参考。【方法】将锦鲤分为免疫组、阴性对照组和阳性对照组。免疫组注射CEV灭活组织液,阴性、阳性对照组注射等量生理盐水,14 d后用同样方法加强免疫一次。在免疫后21 d内,通过ELISA法检测血清抗体IL-6、IFN-α、IgM、TNF-α水平,通过生化试剂盒测定肝脏抗氧化酶SOD、CAT、GSH-PX、T-AOC、MDA和脾脏免疫酶LZM、NO、AKP、ACP活性,利用实时荧光定量PCR分析脾脏和鳃组织中免疫相关基因C3、IFN-α、IgM、IL-6、TNF-α的表达。免疫21 d后,对免疫组、阳性对照组锦鲤进行攻毒,检测病毒载量、累计死亡率,并通过组织病理学切片观察鳃、肝、肾的组织结构变化。【结果】在血清抗体水平方面,免疫组IL-6、IFN-α、TNF-α在6 h至21 d内均显著高于对照组,IgM在3~21 d内显著升高(P<0.05)。在免疫酶活性方面,肝脏中超氧化物歧化酶(SOD,6 h、1 d、21 d)、过氧化氢酶(CAT,1 d、7~21 d)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px,6 h、3~21 d)活性及总抗氧化能力(T-AOC,1~21 d)在多个时间点显著增强,总抗氧化能力于14 d达最高值,丙二醛(MDA)呈先升后降趋势,且均高显著高于对照组(P<0.05);脾脏中溶菌酶(LZM)活性1、7、14 d显著升高并于14 d达峰值(P<0.05);一氧化氮(NO)含量在7~21 d显著升高(P<0.05);碱性磷酸酶(AKP)活性在6 h时显著升高(P<0.05),之后降低;酸性磷酸酶(ACP)在6 h、14 d、21 d活性增强(P<0.05)。在基因表达层面,脾脏中IL-6于3 d达峰值,IgM在1~3 d和21 d显著上调;INF-α在3 d后显著升高(P<0.05),14 d时达峰值,TNF-α在6 h、1 d、14 d、21d显著升高(P<0.05);补体C3在7 d和21 d显著升高(P<0.05);鳃组织中IL-6、TNF-α在7~21 d持续显著升高,INF-α和补体C3在7~21 d显著上调且于21 d达峰值(P<0.05),IgM在1 d和21 d时显著升高(P<0.05)。攻毒后,免疫组组鳃组织病毒载量在7 d时为22.43拷贝/ng,在14 d时为14.33拷贝/ng,显著低于攻毒对照组组(P<0.05);免疫组累计死亡率为0%,而攻毒对照组死亡率高达43.33%。组织病理结果表明,阳性对照组鳃、肝、肾组织出现严重肿胀、变性和坏死;相比之下,免疫再攻毒组仅见轻微且可逆的病理损伤,组织结构基本正常。【结论】CEV灭活组织液可有效激活锦鲤的体液免疫、增强机体抗氧化及非特异性免疫能力,并上调多种免疫器官中关键免疫基因的表达,从而显著抑制病毒复制、减轻组织病理损伤。该灭活组织液对预防鲤浮肿病毒病有显著效果和应用潜力。