桂枝乙酸乙酯提取物对OGD/R诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及机制研究OA

探讨桂枝乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract of Cinnamomi Ramulus,CREAE)对氧糖剥夺/复氧复糖(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的H9c2细胞损伤的保护作用及机制。采用MTT法检测不同浓度CREAE对细胞活力的影响;MTT法筛选OGD/R最佳造模条件;将细胞分为对照组、OGD/R组、阿司匹林组(20μmol/L)、CREAE高、中、低剂量组(12、6、3μg/mL),MTT法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-18和肌酸激酶同工酶MB(creatine kinase isoenzymes MB,CK-MB)水平,免疫荧光检测高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1 protein,HMGB1)表达和核移位情况,Western blot法检测HMGB1、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、消皮素D(gasdermin D,GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)、前体半胱天冬酶-1(pro-cysteinyl aspartate specific proteinase 1,pro-Caspase-1)、IL-1β等蛋白的表达水平。H9c2细胞过表达HMGB1后进行OGD/R造模,并用12μg/mL CREAE干预,Western blot法检测HMGB1-NLRP3/GSDMD信号通路相关蛋白表达。研究结果表明,12、6、3μg/mL的CREAE对H9c2细胞无明显毒性(P>0.05);OGD/R最佳造模条件为氧糖剥夺16 h,复氧复糖3 h;12μg/mL的CREAE显著提高了造模后H9c2细胞的活力(P<0.001),降低了LDH、CK-MB、IL-1β和IL-18水平(P<0.05,P<0.01),抑制了HMGB1-NLRP3/GSDMD信号通路相关蛋白的表达水平(P<0.05、P<0.01、P<0.001),并减少了H9c2细胞中HMGB1的核移位;HMGB1过表达逆转了CREAE对OGD/R诱导H9c2细胞损伤的保护作用以及对OGD/R诱导H9c2细胞HMGB1-NLRP3/GSDMD信号通路的抑制作用。本研究发现,CREAE可能通过抑制HMGB1-NLRP3/GSDMD信号通路激活减轻OGD/R诱导的H9c2细胞损伤,改善炎症反应,HMGB1可能是其靶蛋白之一,研究结果为桂枝临床治疗心系疾病提供了一定实验依据。