水貂博卡病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立OA

为建立一种高效、准确的水貂博卡病毒检测方法,本试验将水貂博卡病毒的VP2基因与TOPO-TA/Blunt载体相结合构建重组质粒,筛选最佳反应条件,建立了快速、简便的SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法。结果显示:本研究建立的检测方法对在5.15×10^(1)~5.15×10^(9) copies/μL浓度范围内的质粒标准品有良好的线性关系,线性相关系数R^(2)=0.9997,标准曲线为y=-3.566x+41.606。该方法对质粒标准品最低检测浓度为5.15 copies/μL,敏感度比普通PCR提高了100倍。对貂源其他病毒(包括水貂肠炎病毒、水貂阿留申病毒、水貂犬瘟热病毒及水貂圆环病毒)均无交叉反应,特异性强。组内与组间重复试验的变异系数均低于1.5%,重复性良好。运用本试验建立的方法对60株疑似水貂博卡病毒临床样品进行检测,阳性检出率为13.3%(8/60),高于普通PCR检出率8.3%(5/60)。综上,该SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法具有高灵敏度、强特异性和良好的重复性,可作为水貂博卡病毒流行病学调查的有效检测工具。