基于微滴式数字聚合酶链式反应技术检测巴尔通体OA
建立巴尔通体(Bartonella)微滴式数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,ddPCR)的检测方法。以ssrA为靶基因,选择具有巴尔通体属特异性的引物和探针,通过优化引物浓度、探针浓度和退火温度对拷贝数的影响,从而确定检测方法的反应体系和反应条件,对该方法的灵敏性、重复性和特异性等方面进行评价。利用ddPCR方法对口岸监管区域收集的40份鼠形动物样本进行检测,并与实时荧光定量PCR方法进行比较。巴尔通体ddPCR的最佳引物浓度为500 nmol/L,探针浓度为150 nmol/L,退火温度为57℃。ddPCR方法灵敏度高,检测限可至3.1拷贝/μL;重复性好,结果稳定,组间重复变异系数CV%<12%,组内重复变异系数CV%<4%;特异性好,与博卡病毒阳性样本、钩端螺旋体阳性样本、鼠伤寒沙门氏菌(ATCC 14028)、肺炎克雷伯氏菌(ATCC 700603)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)、副溶血性弧菌(ATCC 17802)、大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、单核细胞增生李斯特菌(ATCC 19115)、金黄色葡萄球菌(ATCC 6538)、粪肠球菌(ATCC 29212)、蜡样芽孢杆菌(ATCC 10876)等病原体未出现交叉反应。对40份鼠形动物的肾脏样本检测中,ddPCR方法的阳性检出率为47.5%,实时荧光定量PCR的阳性检出率为40%,两种方法通过Kappa分析具有较高的一致性。巴尔通体ddPCR检测方法特异性强、重复性好、灵敏度高,可为巴尔通体提供新的检测方法。
石筱毓;陈健;刘德星;李婷婷;魏晓雅;聂维忠;郑传发;岳巧云;赖梅凤;邱德义;毕水莲
广东药科大学公共卫生学院,广州510006 中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部),珠海519020中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部),珠海519020中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部),珠海519020中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403 珠海国际旅行卫生保健中心(拱北海关口岸门诊部),珠海519020中华人民共和国秦皇岛海关,秦皇岛066002中山海关技术中心食品检验室,中山528403中山火炬职业技术学院,中山528403广东药科大学公共卫生学院,广州510006 中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403中山海关技术中心国家医学媒介生物监测重点实验室,中山528403广东药科大学公共卫生学院,广州510006
农业科技
巴尔通体微滴式数字聚合酶链式反应ssrA基因
《中国动物传染病学报》 2026 (1)
P.128-134,7
海关总署科研项目(2020HK121,2021HK144)中山市社会公益与基础研究项目(2021B2009)拱北海关科研项目(2021GK009,2023GK002,2023GK004)河北省重点研发计划(213777109D)。
评论