猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株的构建及其应用OA

旨在建立猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株(CRFK-TMED10),为猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)体外增殖,研究其感染机制提供重要工具。首先,通过特异性PCR,从猫肠道组织cDNA文库中,获得猫源TMED10基因编码序列,并进行生物信息分析,发现猫源TMED10为双跨膜的亲水性蛋白,具有分泌信号肽,与牛源TMED10亲缘关系最近。其次,利用3质粒慢病毒包装系统构建含猫源TMED10基因的重组慢病毒,感染猫肾上皮细胞(crandell-rees feline kidney,CRFK),并通过杀稻瘟菌素进行加压筛选,随后利用Western blot、IFA对阳性细胞进行鉴定,最终获得稳定过表达猫源TMED10蛋白的CRFK-TMED10细胞系。此外,研究发现FIPV SH2021毒株在该细胞系中的增殖能力显著提高。本研究为后续探索TMED10促进FIPV增殖的分子机制提供了重要工具。