郁平神安颗粒对失眠模型小鼠神经元自噬的调控作用OA

背景:现代医学治疗失眠伴焦虑多采用苯二氮䓬类药物,长期服用易致药物依赖及不良反应;中医药基于辨证论治,疗效确切,安全性高,具有多通路、多靶点综合作用,为该病治疗提供了新的思路与方向。目的:探讨郁平神安颗粒通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路对失眠伴焦虑小鼠海马神经元自噬的影响。方法:采用超高效液相色谱-质谱联用鉴定郁平神安颗粒成分,并结合网络药理学预测关键通路。将90只C57BL/6J雄性小鼠随机分为正常组、模型组和郁平神安低、中、高剂量组[3.125,6.25,12.5 g/(kg·d)]、右佐匹克隆组[0.06 mg/(kg·d)],回复-模型组,回复-模型+磷脂酰肌醇3激酶抑制剂组[10 mg/(kg·d)],回复-郁平神安[12.5 g/(kg·d)]+抑制剂组[10 mg/(kg·d)],每组10只。除正常组外,其余各组均暴露于慢性不可预知温和刺激14 d和腹腔注射对氯苯丙氨酸4 d构建失眠伴焦虑小鼠模型。行为学评估采用旷场和戊巴比妥钠睡眠实验;苏木精-伊红染色与尼氏染色观察海马病理变化;酶联免疫吸附测定法检测5-羟色胺、γ-氨基丁酸、多巴胺、去甲肾上腺素水平;免疫荧光检测微管相关蛋白轻链3B表达;蛋白免疫印迹法检测磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路相关蛋白和自噬相关蛋白(P62、Beclin-1、微管相关蛋白轻链3B)及5-羟色胺受体1A蛋白表达;透射电镜观察自噬小体数量。结果与结论:①超高效液相色谱-质谱联用鉴定出郁平神安颗粒的2276种成分,筛选出35种主要成分;②网络药理学分析显示,磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路为潜在作用靶点;③与正常组相比,模型组小鼠的探索行为增加、睡眠潜伏期延长(P<0.01),海马神经元损伤显著,5-羟色胺、γ-氨基丁酸水平降低,多巴胺、去甲肾上腺素水平升高(P<0.01),微管相关蛋白轻链3B荧光及蛋白表达上调(P<0.01),磷酸化磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白、P62、5-羟色胺受体1A表达下调,Beclin-1、微管相关蛋白轻链3B表达上调(P<0.05),自噬小体数量增多;④与模型组相比,回复-模型+抑制剂组损伤加重,郁平神安高剂量组及回复-郁平神安+抑制剂组可显著逆转上述变化,改善行为学指标,减轻神经元损伤,升高5-羟色胺、γ-氨基丁酸水平,降低多巴胺、去甲肾上腺素水平(P<0.05),回调自噬相关蛋白表达(P<0.05),自噬小体减少。结果表明:郁平神安通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路、调节神经递质平衡并抑制海马神经元过度自噬,改善失眠伴焦虑症状。