基于TIM-3调控巨噬细胞极化探讨疏肝理脾汤干预代谢相关脂肪性肝炎大鼠作用机制OA

目的:基于T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(TIM-3)调控巨噬细胞极化的机制,从动物实验、细胞实验探讨疏肝理脾汤干预代谢相关脂肪性肝炎(MASH)大鼠的作用靶点及免疫学机制。方法:将30只雄性SD大鼠随机分为疏肝理脾汤组、模型组、空白组,每组10只,空白组予常规饲料,疏肝理脾汤组、模型组予蛋氨酸-胆碱缺乏饲料4周,构建MASH动物模型。造模成功后,3组均给予正常饮食,疏肝理脾汤组给予疏肝理脾汤[6.18 g/kg(按生药计)],其余2组给予等量生理盐水。干预4周后,Masson染色评估肝组织病理,蛋白质印迹(Western blotting)法、免疫组化法评估TIM-3表达。脂多糖(LPS)诱导RAW264.7巨噬细胞极化,分为对照组(20%空白血浆+1μg/mL LPS共培养)、中药组(20%疏肝理脾汤含药血浆+1μg/mL LPS共培养),另设一组不加血浆,只含CCK-8的培养基空白组。分别在干预12、24、48 h后,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测法检测细胞活性,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测炎症因子,流式细胞术检测M1/M2表型标志物。结果:空白组大鼠肝组织的肝细胞结构正常,模型组、疏肝理脾汤组大鼠肝组织可见肝细胞脂肪变和气球样变,炎症细胞浸润。与空白组比较,模型组及疏肝理脾汤组大鼠肝组织TIM-3表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,疏肝理脾汤组肝组织TIM-3表达显著增强(P<0.01)。与空白组比较,干预12、24、48 h对照组、中药组RAW264.7细胞活性显著增强(P<0.01);与对照组比较,干预12、24、48 h中药组RAW264.7细胞活性显著增强(P<0.01);干预12、24、48 h对照组、中药组进行组内两两比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。各组RAW264.7细胞上清液检测,干预12、48 h中药组TNF-α、IL-6表达水平,CD80、CD86阳性比例均低于对照组(P<0.01),中药组IL-10、TGF-β表达水平,CD206、Arg-1阳性比例均高于对照组(P<0.01);干预12、24、48 h对照组、中药组进行组内两两比较,随时间延长,IL-6及TNF-α水平均持续升高(P<0.01),IL-10及TGF-β水平均持续降低(P<0.01);干预48 h对照组、中药组CD80、CD86阳性比例均高于同组干预12 h(P<0.01),Arg-1,CD206阳性比例均低于同组干预12 h(P<0.01)。结论:疏肝理脾汤能通过上调TIM-3蛋白表达,调控巨噬细胞M1/M2极化平衡,抑制促炎级联反应并增强抗炎修复功能,从而改善MASH病理进程。