阴沟肠杆菌复合群替加环素耐药机制研究OA

目的研究阴沟肠杆菌复合群(ECC)替加环素耐药机制,为临床合理用药和细菌耐药防控提供依据。方法回顾性收集2020年1月至2024年6月衢州市人民医院临床样本中分离出的19株替加环素不敏感ECC菌株,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术进行菌种鉴定。通过全自动药物敏感性分析仪和微量肉汤稀释法测定17种临床常用抗菌药物最小抑菌浓度(MIC);通过全基因组测序和生物信息学分析进行菌株的序列分型(ST)、耐药基因、核心基因组单核苷酸多态性(cgSNP)差异以及系统发育分析;使用外排泵抑制剂评估外排泵在耐药中的作用;通过荧光定量PCR检测耐药基因表达水平并分析表达水平与替加环素MIC的关系。结果药物敏感性结果显示19株菌株对替加环素、米诺环素、四环素、环丙沙星、左氧氟沙星、头孢噻肟、头孢吡肟、头孢他啶高度耐药。多位点ST共发现11个已知ST型,以ST171(共7株)最为常见。共筛查到11大类抗菌药物的40种不同耐药基因,其中介导替加环素耐药的oqxAB外排泵系统耐药基因oqxA、oqxB、β-内酰胺酶类相关耐药基因blaACT-5检出率均为100.0%(19/19),其次是磷霉素相关耐药基因fosA检出率为94.7%(18/19),四环素类相关耐药基因tet(A)检出率为89.5%(17/19),甲氧苄啶相关耐药基因dfrA检出率为84.2%(16/19)。系统发育分析显示有7株菌株之间的距离小于克隆传播阈值(<18 SNP),位于同一分支上。在N-甲基吡咯烷酮抑制剂的作用下19株ECC替加环素的MIC降低至原来1/8~1/16。与替加环素敏感菌株Q59相比,100.0%(19/19)的不敏感菌株acrA基因表达上调70.97~3852.13倍,随着替加环素MIC的增加其表达水平显著增加(P<0.05);acrB基因上调4.09~592.81倍,MIC≥8 mg/L时表达水平显著增加(P<0.05);94.7%(18/19)的菌株oqxA基因表达上调3.75~98.03倍,MIC增加时差异无统计学意义(P>0.05)。100.0%(19/19)的菌株oqxB基因表达上调3.18~233.34倍,MIC≥8 mg/L时表达水平显著增加(P<0.05)。结论替加环素不敏感ECC菌株携带多种耐药基因,acrA、acrB和oqxB基因的表达上调与替加环素耐药性显著相关,ST171型为主要流行型别,在院内已有同源传播趋势,需加强监测与防控。