DAPK1/MAPK1轴调节帕金森病模型中的神经元损伤OA

目的阐明死亡相关蛋白激酶1(death-associated protein kinase 1,DAPK1)/有丝分裂蛋白激酶1(mitogen-activated protein kinase 1,MAPK1)轴在帕金森病(parkinson’s disease,PD)致病机制中的机制。方法采用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)和1-甲基-4-苯基吡啶(1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP+)构建体内PD模型和体外PD细胞模型,构建si-DAPK1和oe-MAPK1质粒转染至细胞中,RT-qPCR和Western blot用于评估转染效率。通过CCK-8、流式细胞术、试剂盒检测和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测评估细胞活力、细胞凋亡水平、Caspase-3和Caspase-9活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物变形酶(superoxide dismutase,SOD)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、白介素1β(interleukin 1β,IL-1β)和白介素6(interleukin 6,IL-6)水平。利用数据库STRING进行蛋白互作预测,并采用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CO-IP)进行验证。结果在体内PD模型和体外PD细胞模型中DAPK1和MAPK1的表达水平显著升高。沉默DAPK1减轻MN9D细胞中MPP+诱发细胞凋亡和半胱天冬酶-3(Caspase-3)和Caspase-9水平,降低了LDH、ROS、TNF-α、IL-1β和IL-6的含量,增加了SOD的含量。细胞中DAPK1与MAPK1的相互作用。过表达MAPK1后抑制了沉默DAPK1的作用,促进了MPP+诱发神经炎症。结论沉默DAPK1通过与MAPK1相互作用,缓解了MPP^(+)诱发的细胞毒性发挥神经保护作用,是PD治疗的潜在靶点。