基于蛋白质组学探讨益肝化瘀方改善肝纤维化的机制OA

目的探讨益肝化瘀方改善小鼠肝纤维化的作用及机制。方法将小鼠随机分为空白组(生理盐水)、模型组(生理盐水)和益肝化瘀方低、高剂量组(28.98、57.96 g/kg,以生药量计),每组8只。除空白组外,其余各组均腹腔注射15%四氯化碳橄榄油溶液建立肝纤维化模型。自造模第3周起,每天灌胃给药/生理盐水1次,连续4周。末次给药后,计算肝脏指数,检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及肝组织中羟脯氨酸(HYP)含量;评估肝组织病理学变化;基于蛋白质组学分析肝组织中差异表达蛋白,对其进行生物信息学分析,并利用蛋白免疫印迹(WB)法及免疫组化(IHC)法验证核心差异蛋白的表达情况。结果与空白组相比,模型组小鼠肝脏指数以及血清中ALT、AST活性和肝组织中HYP含量均显著升高(P<0.05),肝组织出现明显病理损伤及胶原纤维沉积。与模型组相比,益肝化瘀方高剂量组小鼠上述指标均显著降低(P<0.05),肝脏病理损伤及胶原纤维沉积明显改善。在模型组与益肝化瘀方高剂量组中,共筛选出210个差异蛋白;差异蛋白显著富集于细胞外基质(ECM)-受体相互作用、脂质代谢等通路。WB法及IHC法检测结果表明,益肝化瘀方能显著抑制模型小鼠肝组织中异常升高的Ⅳ型胶原α1链(COL4A1)、富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)、玻连蛋白(VTN)和层粘连蛋白亚基α5(LAMA5)的表达(P<0.05)。结论益肝化瘀方可能通过抑制COL4A1、LAMA5、SPARC及VTN等蛋白的表达,从而阻断ECM-受体相互作用通路,进而抑制ECM的过度沉积与基底膜重构,最终发挥抗肝纤维化作用。