lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-126-5p调控结肠癌奥沙利铂耐药的体外研究OA

目的探讨lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-126-5p体外调控结肠癌奥沙利铂耐药的作用机制。方法采用CCK8法检测奥沙利铂耐药结肠癌细胞株的半数抑制浓度(IC50)及细胞耐药倍数;采用qRT-PCR检测不同结肠癌组织和细胞株中lncRNA KCNQ1OT1及miR-126-5p的表达,采用starBase数据库预测和双荧光素酶报告基因验证lncRNA KCNQ1OT1、ERCC1与miR-126-5p之间的靶向关系。培养HCT116/L-OHP细胞株,设control组、si-NC组、si-KCNQ1OT1组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-NC组、si-KCNQ1OT1+anti-miR-126-5p组,其中si-KCNQ1OT1组转染KCNQ1OT1 siRNA。CCK8法检测不同浓度药物对细胞增殖的影响,流式细胞术检测各组细胞的凋亡变化,蛋白印迹法检测ERCC1蛋白表达。结果与铂敏感结肠癌组织和亲本细胞株相比,结肠癌耐药组织和耐药细胞中KCNQ1OT1表达水平显著升高,miR-126-5p表达水平显著降低(P<0.05)。双荧光素酶报告实验证实,KCNQ1OT1与miR-126-5p、ERCC1与miR-126-5p之间有结合位点,存在靶向关系。与control组和si-NC组相比,敲低lncRNA KCNQ1OT1可显著抑制HCT116/L-OHP细胞增殖,KCNQ1OT1、ERCC1表达下调,miR-126-5p表达上调(P<0.05);与si-KCNQ1OT+si-miR-NC组相比,si-KCNQ1OT1+antimiR-126-5p增殖抑制率显著降低,ERCC1表达上调,miR-126-5p表达下调,差异均有统计学意义(P<0.05);流式细胞术结果显示,敲低lncRNA KCNQ1OT1后细胞凋亡率为(26.22±3.87)%,显著高于control组的(15.05±2.29)%和si-NC组的(13.89±2.84)%,差异有统计学意义(P<0.05),与si-KCNQ1OT+si-miR-NC组相比,siKCNQ1OT1+anti-miR-126-5p组凋亡率显著降低[(25.28±3.92)%vs.(19.78±3.75)%,P<0.05]。结论lncRNA KCNQ1OT1通过靶向miR-126-5p调控ERCC1表达,逆转铂类耐药,促进结肠癌细胞增殖并抑制其凋亡。