非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体的制备及功能鉴定OA
Preparation and characterization of monoclonal antibodies against African swine fever virus K205R protein
为制备非洲猪瘟病毒(ASFV)K205R蛋白单克隆抗体并鉴定其生物学特性,利用细胞融合技术制备抗体,通过免疫印迹、间接免疫荧光、免疫共沉淀试验验证抗体特异性,用间接ELISA测定抗体效价,并进行亚型鉴定,最后通过中和试验鉴定其病毒中和活性.结果显示,真核表达的K205R蛋白大小在 23 kDa左右,与预测大小一致;筛选获得 5 株针对K205R蛋白的单克隆抗体细胞株,免疫印迹显示 5 株单克隆抗体对ASFV感染细胞样品中的K205R蛋白有较强的特异性反应,不与口蹄疫病毒感染样品发生交叉反应;间接免疫荧光试验进一步证实,5 株单克隆抗体对细胞中转染或ASFV感染产生的K205R蛋白具有特异性识别能力;间接ELISA测定 5 株单抗的效价最高可达 1∶819 200;亚型鉴定结果显示 5 株单抗的重链均为IgG1,轻链均为Kappa;中和试验结果显示单抗A11-E11 具有一定的病毒中和活性;免疫共沉淀试验进一步验证A11-E11 株抗体能特异性结合ASFV感染的猪肺泡巨噬细胞中的K205R蛋白.综上所述,成功制备了针对ASFV K205R蛋白的单克隆抗体,该抗体对K205R蛋白具有较好的特异性,为进一步研究K205R蛋白的生物学功能奠定了基础,同时为非洲猪瘟诊断技术的建立提供了材料.
To generate monoclonal antibodies(mAbs)against the K205R protein of African swine fever virus(ASFV)and characterize their biological properties,cell fusion technology was employed.The specificity of the antibodies was assessed using Western-blot,indirect immunofluorescence assay(IFA)and co-immunoprecipitation(Co-IP).Antibody titers and subtypes were determined via ELISA method,and virus neutralization activity was evaluated through neutralization assay.Results showed that the eukaryotic-expressed K205R protein had a molecular weight of approximately 23 kDa,consistent with the expected size.Five hybridoma cell lines secreting K205R mAbs were screened.Western-blot analysis demonstrated that all five mAbs specifically recognized the K205R protein in ASFV-infected cell lysates,without cross-reaction with samples infected with foot-and-mouth disease virus.IFA further confirmed their specific binding to K205R in both transfected and ASFV-infected cells.The highest an-tibody titer could reach 1∶819 200 as determined by indirect ELISA.Isotype analysis showed that all five mAbs belonged to the IgG1 subclass with kappa light chains.Neutralization assay revealed that one of the mAbs,A11-E11,exhibited certain neutralizing activity for ASFV.Co-IP assay also verified A11-E11 mAbs can bind K205R protein in ASFV-infected porcine alveolar macrophages.In conclusion,this study successfully produced monoclonal antibodies against the ASFV K205R protein with high specificity,pro-viding a foundation for further investigation into the biological function of K205R and valuable mate-rial for the development of diagnostic techniques for African swine fever.
叶银波;周斌;赵倩;黄丹妮;杨洋;孙波涛;程颜;刘永杰;秦晓东;郑海学
南京农业大学 动物医学院,江苏 南京 210095||中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000南京农业大学 动物医学院,江苏 南京 210095中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000华南农业大学 兽医学院,广东 广州 510642中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000南京农业大学 动物医学院,江苏 南京 210095安徽农业大学 动物医学院,安徽 合肥 230036中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室 国家口蹄疫参考实验室,甘肃 兰州 730000
农业科技
非洲猪瘟病毒K205R蛋白单克隆抗体细胞融合技术
African swine fever virusK205R proteinmonoclonal antibodycell fusion technology
《中国兽医科学》 2026 (4)
512-519,8
江苏省农业科技自主创新资金项目(CX(24)1010)甘肃省联合科研基金重大项目(24JRRA806)
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