无创胎儿M血型抗原实时荧光定量PCR基因分型方法的建立及初步评价OA
Establishment and preliminary evaluation of a non-invasive fetal M blood group genotyping method by real-time PCR
目的 从母体血浆中提取胎儿游离 DNA(Cell-free fetal DNA,cff-DNA),建立胎儿 M 血型抗原基因分型的检测方法,从而指导检出 IgG 抗-M 抗体的 M 抗原阴性孕妇的孕期管理.方法 建立实时荧光定量 PCR(Real-time PCR)方法,通过基因组 DNA 配比稀释,确证方法的特异性和灵敏度.随后,纳入 12 例 M 抗原阴性孕妇,提取孕妇外周血血浆中的胎儿游离 DNA(cff-DNA),对胎儿进行 M 抗原基因分型,根据有/无扩增曲线判断胎儿 M 抗原为 M阳性/M 阴性.通过比对胎儿 M 抗原基因分型结果和新生儿出生后脐血或外周血 M 抗原血清学检测结果,初步验证该方法的准确性.结果 在纳入的 12 例 M 抗原阴性孕妇中,5 例检出抗-M,其中 4 例存在 IgG 抗-M,且 1 例发生了胎儿期贫血.胎儿 M 抗原基因分型结果为 M 阳性的 9 例(9/12,75%),M 阴性的 3 例(3/12,25%).有 4 例基因分型结果为 M 阳性的胎儿和 1 例基因分型结果为 M 阴性的胎儿,在出生后收集到了血液标本,这 5 例标本血清学检测结果与基因分型检测结果一致.结论 我们首次建立了无创产前胎儿 M 血型抗原基因检测方法,初步证明了利用母体血浆 cff-DNA 通过实时荧光定量 PCR 方法预测胎儿 M 抗原基因型的可行性.
Objective To establish a method for the genotyping of fetal M blood group antigen by extracting cell-free fe-tal DNA(cff-DNA)from maternal plasma,so as to guide the management of M antigen-negative pregnant women with IgG anti-M antibody during pregnancy.Methods A realtime fluorescent quantitative PCR(realtime PCR)method was estab-lished.The specificity and sensitivity of the method were validated by dilution of genomic DNA.Subsequently,a total of 12 M antigen-negative pregnant women were enrolled.The cff-DNA was extracted from maternal plasma,and fetal M antigen genotyping was performed by realtime PCR.Fetuses were classified as M-positive or M-negative according to the presence or absence of amplification curve.The accuracy of the method was validated by comparing fetal M antigen genotyping results with the serological results using the cord or peripheral blood of the neonate at birth.Results Among the 12 M antigen-negative pregnant women,anti-M was detected in five cases,of which four cases had IgG anti-M,and one case had fetal a-nemia.The results of fetal M antigen genotyping showed that 9 cases were M-positive(9/12,75%)and 3 cases were M-negative(3/12,25%).Serological results of blood samples collected after birth from four M-positive fetuses and one M-negative fetus were consistent with the genotyping results.Conclusion We have,for the first time,established a non-inva-sive prenatal genotyping method for fetal M antigen using maternal plasma cff-DNA,and preliminarily demonstrated the fea-sibility of this method.
贾双双;莫春妍;魏玲;温机智;张润青;姬艳丽
广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095广州血液中心,广东 广州 510095||广州医科大学输血与血液病研究所,广东 广州 510095||广州市血液安全重点实验室,广东 广州 510095
医药卫生
抗-M胎儿新生儿溶血病胎儿游离DNA无创胎儿M抗原基因检测实时荧光定量PCR方法
anti-M related hemolytic disease of the fetus and newborn(HDFN)cell-free fetal DNA(cff-DNA)non-invasive fetal M antigen genotypingreal-time fluorescent quantitative PCR
《中国输血杂志》 2026 (4)
493-500,8
广东省医学科学技术研究项目(B2023201)广州市科技计划项目(2025A03J3449)广州市医学重点学科(2025-2027).
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