温阳通脉灸法通过线粒体途径对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠内皮相关凋亡因子的影响OA

目的研究“温阳通脉”灸法对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)小鼠线粒体形态、功能及细胞凋亡水平的影响,探讨其防治AS的作用机制。方法8周龄SPF级雄性ApoE^(-/-)小鼠22只,随机分为模型组和艾灸组,每组11只,高脂饲料饲养复制AS模型。11只C57BL/6J小鼠作为对照组,普通饲料饲养。各组小鼠均在造模第1天开始干预,对照组、模型组仅抓取固定,艾灸组小鼠于“膻中”“神阙”“内关”(双侧)及“血海”(双侧)穴处行艾灸治疗,每日1次,每次30 min,每周连续5次,共干预12周后取材。用酶法测定血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)含量,比色法测定血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠胸主动脉病理形态结构;透射电镜观察小鼠胸主动脉线粒体形态;流式细胞术(JC-1)检测胸主动脉线粒体膜电位(MMP)变化;免疫荧光染色法检测胸主动脉Cytochrome C(CytC)蛋白表达;免疫组化和Western blot法检测胸主动脉Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果与对照组比较,模型组小鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著升高(P<0.01),HDL-C含量降低(P<0.01);小鼠的胸主动脉结构呈血管内膜增厚,内皮细胞变性、肿胀和脱落,可见泡沫细胞;线粒体大量肿胀,嵴数量大大减少;线粒体膜电位水平明显下降(P<0.01);胸主动脉组织CytC蛋白含量明显升高(P<0.01);Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与模型组比较,艾灸组小鼠血清TC、TG、LDL-C含量显著下降(P<0.05或P<0.01);小鼠胸主动脉管腔较为规则,内膜可见少量的内皮细胞变性和肿胀;线粒体轻度肿胀,嵴结构排列较整齐;线粒体膜电位水平明显上升(P<0.01);胸主动脉组织CytC蛋白表达含量明显降低(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达水平明显降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论“温阳通脉”灸法通过改善线粒体形态及功能,降低细胞凋亡水平,从而防治AS。