抗紫色色杆菌自转运蛋白单抗的制备OA
为制备紫色色杆菌(Chromobacterium violaceum)自转运蛋白(Autotransporter,AT)的单克隆抗体,本研究针对紫色色杆菌CV20菌株的自转运蛋白β结构域(AT-β-domain),制备其原核表达蛋白,免疫小鼠;采用细胞融合技术制备分泌抗紫色色杆菌自转运蛋白单抗的杂交瘤细胞,通过间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞、采用Western blot和间接免疫荧光等方法鉴定单抗特异性。结果显示,成功构建了pET-28a-AT-β-domain质粒,获得表达菌株,纯化得到的蛋白为38 ku;以此免疫小鼠后,血清抗体效价分别为1∶64000、1∶128000;共筛选到了6株阳性杂交瘤细胞株,通过间接ELISA鉴定在连续传代及冻存后OD_(450nm)无显著差异性,具有稳定性;分泌的单抗亚类为IgG1,亚型鉴定轻链均为κ链。单抗经Western blot和细菌免疫荧光鉴定,能够特异性识别纯化的原核表达蛋白和紫色色杆菌。结果表明,本研究成功制备出了抗紫色色杆菌自转运蛋白的单抗。
林佳琦;徐素慧;梅贵恒;刘蓓;马燕梅;修云芳
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农业科技
紫色色杆菌CV20菌株自转运蛋白单克隆抗体
《动物医学进展》 2026 (4)
P.91-97,7
福建省福州市科技计划项目(2023-S-036)福建农林大学科技创新专项基金项目(KFb22066XA)。
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