针刺百会、足三里调控"脑肠轴"肠道菌群-炎症-神经营养通路改善卒中后抑郁模型大鼠抑郁样行为机制研究OA

目的:观察针刺百会、足三里对卒中后抑郁(PSD)模型大鼠肠道菌群-炎症-神经营养通路相关指标的影响,探讨该针法改善卒中后抑郁样行为的作用机制.方法:选取若干SPF级雄性SD大鼠,采用大脑中动脉阻塞再灌注(MCAO/R)联合21 d慢性不可预测温和应激(CUMS)的方法制备PSD大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为卒中后抑郁组、针刺组和药物组,另设假手术组(仅分离右侧颈总、颈内、颈外动脉)和卒中组(仅行MCAO/R手术,不给予CUMS干预),每组12只.PSD模型制备成功后次日,针刺组予针刺百会穴、双侧足三里穴,留针30min,连续14d;药物组使用氟西汀10mg/(kg·d)灌胃,连续14d;针刺与药物干预期间,假手术组、卒中组正常饲养;卒中后抑郁组、针刺组、药物组继续给予CUMS刺激.干预结束后采用糖水偏好试验、旷场试验评估各组大鼠抑郁样行为改善情况,苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠结肠与海马组织病理形态变化并进行损伤评分,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测各组大鼠结肠与海马组织白细胞介素(IL)-10、IL-17蛋白相对表达量,酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)水平,16S rRNA基因测序法检测各组大鼠肠道菌群组成、多样性及结构特征.结果:卒中组、卒中后抑郁组大鼠糖水偏好率、旷场5 min总活动距离、旷场中心停留时间均明显低于假手术组(P＜0.05);卒中后抑郁组上述指标明显低于卒中组(P＜0.05),针刺组、药物组明显高于卒中后抑郁组(P＜0.05).旷场5 min活动轨迹图示,卒中后抑郁组轨迹集中于旷场边缘,探索行为受限;针刺组、药物组轨迹分布更均匀,中心区域探索频次增多.卒中组、卒中后抑郁组大鼠结肠Chiu评分和海马神经元损伤评分均明显高于假手术组(P＜0.05),卒中后抑郁组上述评分明显高于卒中组(P＜0.05),针刺组、药物组明显低于卒中后抑郁组(P＜0.05).结肠组织HE染色结果显示,卒中后抑郁组黏膜层水肿增厚、上皮大量脱落,局部见糜烂及浅表溃疡,黏膜下层增厚且中性粒细胞、淋巴细胞大量浸润,绒毛紊乱断裂;针刺组与药物组黏膜水肿减轻、上皮脱落减少,糜烂溃疡愈合,黏膜下层炎症细胞减少、厚度趋近正常,绒毛形态规整.海马组织HE染色结果显示,卒中后抑郁组＞50％神经元变性坏死(胞体肿胀不规则、核固缩溶解),间隙增宽紊乱,胶质细胞弥漫增生伴炎症浸润;针刺组与药物组神经元变性比例＜25％,胞体形态恢复,核固缩及胶质增生减少,炎症浸润消失.卒中组、卒中后抑郁组大鼠结肠与海马组织IL-10及BDNF、NGF水平明显低于假手术组(P＜0.05),卒中后抑郁组明显低于卒中组(P＜0.05),针刺组、药物组明显高于卒中后抑郁组(P＜0.05);卒中组、卒中后抑郁组结肠与海马组织IL-17水平明显高于假手术组(P＜0.05),卒中后抑郁组明显高于卒中组(P＜0.05),针刺组、药物组明显低于卒中后抑郁组(P＜0.05).针刺组与药物组上述指标组间比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).16S rRNA测序结果显示,卒中后抑郁组乳杆菌属丰度减少,肠杆菌科丰度升高,卒中后抑郁组大鼠肠道菌群Chao1指数明显低于假手术组(P＜0.01);假手术组与卒中后抑郁组肠道菌群基因序列数据集呈现明显分离,针刺组样本则向假手术组聚集(P=0.0004);针刺组富集乳杆菌属等有益菌,卒中后抑郁组优势菌种为肠杆菌科相关分类单元.结论:针刺百会、足三里可显著改善PSD模型大鼠抑郁样行为,减轻脑肠组织病理损伤,其作用机制可能与靶向重塑肠道菌群结构、平衡脑肠组织IL-10/IL-17、上调脑组织BDNF与NGF表达有关.