牛结节性皮肤病病毒A33R蛋白的截短表达及间接ELISA抗体检测方法的建立OA
Truncated expression of lumpy skin disease virus A33R protein and establishment of indirect ELISA antibody detection method
为了建立一种快速准确的牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ELISA抗体检测方法,本研究参考GenBank中的LSDV A33R基因序列,设计截去编码跨膜区片段,密码子优化后合成该截短基因并克隆至原核表达质粒pET-28a,构建了重组质粒pET-28a-A33R△45-67aa,IPTG诱导表达A33R△45-67aa蛋白,纯化后以其作为诊断抗原建立间接ELISA抗体检测方法.结果显示,利用大肠杆菌成功表达并纯化获得分子质量为21 kDa的重组A33R△45-67aa蛋白,并建立了 LSDV间接ELISA抗体检测方法,该方法具有良好的特异性和敏感性.批间和批内重复试验变异系数均低于10％,表明该间接ELISA方法重复性良好,稳定性高.该方法与ID Screen®Capripox双抗原夹心ELISA试剂盒检测结果总符合率为97.7％,表明其可用于LSDV的抗体检测,将为LSD的防控提供技术支撑.
To establish a rapid and accurate ELISA antibody detection method for LSDV,this study referred the LSDV A33R gene sequence from GenBank and then designed a truncated gene with the optimized codons by removing the transmembrane region fragment.The truncated gene was synthesized and cloned into the prokaryotic expression plasmid pET-28a,constructing a recombinant expression plasmid pET-28a-A33R△45-67aa.The A33R△45-67aa protein was induced to express by IPTG and purified,then used as a diagnostic antigen to establish an indirect ELISA antibody detection method.The results showed that the recombinant A33R△45-67aa protein with a molecular weight of 21 kDa was successfully expressed and purified in E.coli,and the established indirect ELISA method exhibited good specificity and sensitivity.Both inter-batch and intra-batch coefficients of variation were below 10％,indicating that the indirect ELISA method had high repeatability and stability.The overall coincidence rate of the test results of this method with the French ID Screen®Capripox double antigen sandwich ELISA kit was 97.7％.The indirect ELISA method can be used for the antibody detection of LSDV and will provide technical support for LSD prevention and control.
包燕玲;宋昱庆;户鑫兵;钟匀汝;田占成;苟惠天;关贵全;殷宏;独军政
中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃农业大学 动物医学院,甘肃兰州 730070||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046甘肃农业大学 动物医学院,甘肃兰州 730070中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046||江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009中国农业科学院 兰州兽医研究所 兰州大学动物医学与生物安全学院 动物疫病防控全国重点实验室,甘肃兰州 730000||甘肃省病原生物学基础学科研究中心,甘肃兰州 730046
农业科技
牛结节性皮肤病病毒A33R△45-67aa蛋白截短表达间接ELISA
lumpy skin disease virusA33R△45-67aa proteintruncated expressionindirect ELISA
《中国兽医科学》 2026 (3)
335-341,7
国家重点研发计划项目(2024YFD1800100,2021YFD1800500)甘肃省基础研究创新群体项目(22JR5RA024)国家肉牛牦牛产业技术体系专项(CARS-37)中国农业科学院科技创新工程(CAAS-ASTIP-2021-LVRI)
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