芦丁促线粒体自噬减轻环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全OA

目的 探究芦丁对环磷酰胺(CTX)诱导的早发性卵巢功能不全(POI)小鼠的作用及其机制.方法 将小鼠随机分为空白组、模型组、N-乙酰半胱氨酸组及芦丁低、高剂量组.建立CTX诱导的POI模型,采集卵巢组织及血清,组织苏木精-伊红染色法(HE)染色计数卵泡及黄体数量,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清促卵泡刺激素(FSH)、抗缪勒管激素(AMH)、雌二醇(E2)水平,体外受精评估胚胎发育,蛋白质印迹(Western Blot)检测卵巢组织PINK1、Parkin、LC3-Ⅱ/Ⅰ及磷酸化DRP1(dDRP)蛋白表达.建立 4-过氧化氢环磷酰胺(4-HC)诱导的卵母细胞损伤模型,并使用芦丁拯救,分为 4-HC单药处理组及 4-HC联合低、高剂量芦丁干预组,统计生发囊泡破裂率(GVBD)和中期Ⅱ阶段(MⅡ期)卵母细胞比例评估核质成熟度,并采用免疫荧光技术检测PINK蛋白表达.结果 与模型组相比,芦丁高剂量组有效减轻卵巢萎缩,提升生长卵泡(P＜0.000 1)与黄体数量(P=0.015 6),显著逆转血清AMH(P=0.005 2)、E2(P＜0.000 1)降低及FSH升高(P＜0.000 1),增强体外受精过程中囊胚发育潜力(P＜0.000 1).体外实验证实高剂量芦丁使 4-HC损伤的卵母细胞GVBD(P=0.022 1)和MⅡ期形成速率(P=0.000 4)提高.卵巢组织学显示,芦丁高剂量组LC3B-Ⅱ/Ⅰ比值(P=0.005 9)及PINK1(P＜0.000 1)、Parkin(P=0.039 7)表达均上调,dDRP表达下降(P=0.004 7);体外实验补充证实高剂量芦丁使 4-HC诱导的卵母细胞线粒体PINK1 水平升高(P=0.000 6).结论 芦丁通过激活卵巢组织PINK1/Parkin通路增强线粒体自噬,抑制DRP1 介导的线粒体过度分裂,改善CTX诱导的卵泡数减少、内分泌紊乱及卵母细胞发育潜能损伤,从而减轻小鼠早发性卵巢功能不全.