康欣胶囊关键活性成分木犀草素延缓血管内皮细胞衰老机制研究OA

目的 采用网络药理学筛选康欣胶囊延缓血管内皮细胞衰老的关键活性成分,并结合体外实验验证其作用机制.方法 通过网络药理学筛选康欣胶囊活性成分和衰老相关交集靶点,构建中药-活性成分-交集靶点网络图;利用60 μmol/L过氧化氢(H2O2)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)构建细胞衰老模型,通过细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力,从木犀草素、异鼠李素、刺槐素及常春藤皂苷元4种候选成分中筛选出关键活性成分;提取关键活性成分(木犀草素)作用靶点与衰老相关靶点进行映射,获取交集靶点,借助Metascape平台进行京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并利用AutoDock Vina软件进行分子对接验证;采用CCK-8法检测木犀草素的安全浓度及有效浓度,以确定后续给药剂量;将HUVECs采用随机数字表法分为空白组、H2O2组(60 μmol/L H2O2)及木犀草素低、中、高剂量组(2、4、8 μmol/L),采用细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测HUVECs形态及染色阳性率,通过Western blot法检测p53、p-ERK1/2、cGAS及STING蛋白表达水平.结果 网络药理学结合体外评价初筛确定木犀草素为康欣胶囊抗衰老的关键活性成分.木犀草素抗衰老交集靶点174个,KEGG通路富集分析结果显示,木犀草素抗衰老交集靶点主要富集在MAPK信号通路;分子对接证实木犀草素与ERK1/2、cGAS、STING蛋白均具有较强结合能力,结合能均＜-7.0 kcal/mol.木犀草素浓度在10 μmol/L及以下时为安全浓度,在2、4、8、10 μmol/L时为有效浓度,最终确定2、4、8 μmol/L分别作为木犀草素低、中、高剂量组进行后续机制验证.与空白组比较,H2O2 组细胞变圆,间隙增宽,胞质内可见大量深蓝色颗粒状沉淀,SA-β-gal阳性细胞比率升高(P＜0.05),HUVECs中p53、p-ERK1/2、cGAS和STING的蛋白表达量均上升(P＜0.05);与H2O2组比较,木犀草素低、中、高剂量组(2、4、8 μmol/L)随给药浓度增加,蓝色阳性染色细胞显著减少,染色程度逐渐变浅,细胞形态逐步恢复至接近空白组水平,SA-β-gal阳性细胞比率均降低(P＜0.05),且随给药浓度增加而呈剂量依赖性递减,中、高剂量组HUVECs中p53、p-ERK1/2、cGAS和STING的蛋白表达量均下降(P＜0.05).结论 木犀草素是康欣胶囊发挥抗血管内皮细胞衰老作用的关键活性成分,其机制可通过抑制c GAS-STING信号通路激活并下调ERK1/2磷酸化水平,进而改善血管内皮细胞衰老.