肝宝胶囊含药血清对巨噬细胞代谢重编程和Anx A5/PKM2通路的影响OA

目的 观察肝宝胶囊(GBC)含药血清对巨噬细胞代谢重编程和膜联蛋白 A5(Anx A5)/丙酮酸激酶 M2(PKM2)通路的影响.方法 24只SD雄性大鼠适应性喂养7 d后,随机分为空白对照组、GBC组和双环醇片组各8只,分别予蒸馏水、1.47g/(kg·d)GBC、200 mg/(kg·d)双环醇片灌胃,制备含药血清.RAW264.7细胞随机分为空白对照组,模型组,1.25%、2.5%、5%GBC含药血清组和双环醇片含药血清组.分别加入:10%空白血清培养基;含10 ng/mL LPS和10 ng/mL IFN-γ的10%空白血清培养基;含10 ng/mL LPS和10 ng/mL IFN-γ的1.25%、2.5%、5%GBC含药血清,血清浓度不足10%的用空白血清补齐;含10 ng/mL LPS和10 ng/mL IFN-γ的10%双环醇片含药血清.检测细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)含量,检测细胞外酸化率(ECAR)、氧消耗率(OCR)、ATP、乳酸脱氢酶(LDH)和乳酸(LD)水平,Western blot检测细胞中Anx A5、PKM2、p-PKM2和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达水平.结果 与空白对照组比较,模型组细胞上清液中IL-1β含量升高(P＜0.05),细胞OCR和ATP水平及Anx A5蛋白表达均下降(P＜0.05),细胞ECAR、LDH、LD水平及HIF-1α、p-PKM2蛋白表达均升高(P＜0.05).与模型组比较,GBC各含药血清组和双环醇片含药血清组细胞上清液中IL-1β含量均下降(P＜0.05),细胞OCR、ATP水平均升高(P＜0.05),细胞ECAR、LDH、LD水平及HIF-1α、p-PKM2蛋白表达均下降(P＜0.05),2.5%、5%GBC含药血清组和双环醇片含药血清组Anx A5蛋白表达均升高(P＜0.05).与1.25%GBC含药血清组比较,2.5%含药血清组细胞上清液中IL-1β含量较低(P＜0.05),细胞ATP水平较高(P＜0.05),细胞LDH水平较低(P＜0.05);5%GBC含药血清组细胞上清液中IL-1β含量较低(P＜0.05),细胞OCR和ATP水平均较高(P＜0.05),细胞ECAR和LDH水平均较低(P＜0.05).结论 GBC含药血清可能通过调控Anx A5/PKM2通路干预巨噬细胞代谢重编程,抑制巨噬细胞的促炎作用.