棉铃虫细胞色素P450基因(CYP6AE17和CYP6AE19)原核表达及多克隆抗体制备OA

【目的】通过克隆及表达棉铃虫CYP6AE17和CYP6AE19基因,制备鼠抗棉铃虫细胞色素P450(CYP6AE17、CYP6AE19)多克隆抗体,为进一步研究细胞色素P450酶在棉铃虫中的功能奠定基础,为棉铃虫的绿色防控提供理论依据。【方法】构建重组质粒pET32a-CYP6AE,诱导表达并纯化重组蛋白,将其作为抗原免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用ELISA检测多克隆抗体的效价,通过Western blot检测多克隆抗体的特异性。【结果】CYP6AE17、CYP6AE19基因CDS序列全长分别为1572和1587 bp,分别编码523和528个氨基酸。SDS-PAGE分析结果表明,CYP6AE17和CYP6AE19基因均可在大肠杆菌原核表达系统中高效诱导表达,重组蛋白主要以包涵体形式存在。ELISA结果表明,制备的鼠抗棉铃虫CYP6AE17和CYP6AE19多克隆抗体效价分别达1∶1024000和1∶512000,且均可特异性识别棉铃虫体内的天然P450蛋白。【结论】该研究结果为进一步深入研究棉铃虫细胞色素P450酶的功能奠定了材料基础,为棉铃虫防治新靶标的开发提供了理论依据。