基于TaqMan-MGB探针的小麦叶疫病菌快速检测方法OA
【目的】小麦叶疫病菌为我国进境检疫性有害生物,建立特异性的实时荧光PCR检测方法,可实现对其快速、灵敏、准确的检测。【方法】依据小麦叶疫病菌及其近似种翻译延长因子(EF)序列差异,设计合成特异性引物与MGB探针,并优化实时荧光PCR反应条件,优化后引物终浓度为0.7μmol·L^(-1),探针终浓度为0.9μmol·L^(-1)。通过特异性试验、灵敏度试验及模拟样品检测验证该方法的可行性。【结果】特异性试验显示,该方法可特异性检出小麦叶疫病菌;灵敏度试验表明,在10μL反应体系中,最低检测限量为总DNA含量20 pg;模拟样品检测表明,此方法适用于疑似携带小麦叶疫病菌样品的检测。整个反应过程约1 h,且检测全程闭管,无需PCR后续处理。【结论】本研究建立的实时荧光PCR检测方法快速、灵敏、准确,为小麦叶疫病菌的早期快速检测提供了重要技术参考,对防范该检疫性真菌的传入与扩散具有重要意义。
吕友红;朱小琼;刘芳;段维军
宁波检验检疫科学技术研究院,浙江宁波315012 中国农业大学植物保护学院农林生物安全全国重点实验室/农业农村部作物有害生物监测与绿色防控重点实验室,北京100193中国农业大学植物保护学院农林生物安全全国重点实验室/农业农村部作物有害生物监测与绿色防控重点实验室,北京100193中国科学院微生物研究所微生物多样性与资源创新利用全国重点实验室,北京100101宁波检验检疫科学技术研究院,浙江宁波315012 中华人民共和国宁波海关技术中心,浙江宁波315012 宁波市口岸生物与食品安全检测重点实验室,浙江宁波315012
农业科技
小麦叶疫病菌实时荧光PCRTaqMan-MGB探针检测
《生物安全学报(中英文)》 2026 (1)
P.94-102,9
国家重点研发计划(2022YFF0608804)国家自然科学基金项目(32322001)海关总署科研项目(2022HK011)宁波市社会公益科研项目(2022S010)宁波中盛产品检测有限公司项目(2023ZS004)。
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