基于AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路探讨消肿止痛合剂对糖尿病溃疡大鼠氧化应激和炎症损伤的影响OA

目的探讨消肿止痛合剂(Xiaozhong Zhitong Mixture,XZZT)通过AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对糖尿病溃疡大鼠氧化应激和炎症损伤的影响。方法将100只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白(Control)组、模型(Model)组、消肿止痛合剂(XZZT)组、AMPK抑制剂(CC)组、消肿止痛合剂+AMPK抑制剂(XZZT+CC)组,除Control组外,其余各组均通过高脂高糖饲养、腹腔注射链脲佐菌素和皮肤缺损法建立糖尿病溃疡模型大鼠。成模后,XZZT组与XZZT+CC组给予消肿止痛合剂1 mL/(100 g·d)灌胃;Control组、Model组和CC组予以等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,每天1次;CC组和XZZT+CC组一次性腹腔注射0.2 mg/kg AMPK抑制剂Compound C,于干预后第7、14天取材。观察创面大体情况,测量创面面积,计算创面愈合率;采用苏木素-伊红(HE)染色法检测创面肉芽组织病理变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测创面组织中白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量,羟胺法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western blot方法检测创面组织中AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、SIRT1、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)蛋白表达水平;RT-qPCR检测AMPK、SIRT1、IL-6、TNF-αmRNA表达水平。结果与Control组相比,Model组在治疗后的第7、14天IL-6、TNF-α水平、MDA含量、p-NF-κB蛋白表达及IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高,IL-10水平、SOD活性、p-AMPK/AMPK值和SIRT1 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01);与Model组相比,XZZT组创面愈合率、IL-10、SOD、p-AMPK/AMPK值、SIRT1 mRNA及蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α、MDA、p-NF-κB蛋白表达及IL-6、TNF-αmRNA水平降低(P<0.01);而CC组呈现相反趋势(P<0.05);与XZZT组相比,XZZT+CC组IL-6、TNF-α、MDA、p-NF-κB蛋白表达及IL-6、TNF-αmRNA表达水平升高,创面愈合率、IL-10、SOD活性、p-AMPK/AMPK值和SIRT1 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01)。结论XZZT可能通过激活AMPK/SIRT1信号通路,抑制NF-κB磷酸化,有效减轻糖尿病溃疡大鼠的氧化应激和炎症损伤,加速糖尿病溃疡愈合。