CREG调节PINK1/Parkin促进线粒体自噬对脓毒症诱导肺损伤的机制OA

目的探究E1A激活基因阻遏子(CREG)调节PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病少年型蛋白2(Parkin)促进线粒体自噬对脓毒症诱导急性肺损伤(sepsis-induced acute lung injury,S-ALI)的作用。方法肺泡巨噬细胞株MH-S经过1、5、10及15μg/mL脂多糖(LPS)培养后采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测MH-S细胞活性,免疫印迹及定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CREG蛋白及mRNA表达。经5μg/mL LPS培养后细胞活性最高,采用此浓度的LPS进行后续实验。MH-S细胞分为正常组、LPS组、LPS+pLNCX2-CREG组及LPS+pSM2-siCREG组。除正常组外其余各组均经LPS培养,LPS+pLNCX2-CREG组、LPS+pSM2-siCREG组均经5μg/mL LPS培养后分别转染质粒pLNCX2-CREG质粒及pSM2-siCREG质粒,正常组、LPS组不转染。溶酶体红色荧光探针(Lyso-Tracker Red)实验检测细胞溶酶体;流式细胞仪检测分化簇(CD)86及CD206表达;酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒检测各组细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)、活性氧簇(ROS)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;免疫印迹及qRT-PCR检测CREG、PINK1、Parkin及蛋白及mRNA表达。结果与1μg/mL LPS处理的相比,LPS 5μg/mL的MH-S细胞活性升高(P<0.05);与LPS 5μg/mL相比,LPS 10μg/mL、LPS 15μg/mL MH-S细胞活性均降低,且LPS 15μg/mL细胞活性最低(P<0.05);与LPS 1μg/mL相比,LPS 5μg/mL的CREG蛋白及mRNA均差异有统计学意义(P<0.05);与LPS 5μg/mL相比,LPS 10μg/mL、LPS 15μg/mL的CREG蛋白及mRNA均差异有统计学意义(P<0.05);与正常组相比,LPS组溶酶体数量、CD206、SOD、CREG、Parkin、PINK1均降低,CD86、IL-1β、IL-6、IL-10、CRP、ROS、MDA均增加(P<0.05),与LPS组相比,LPS+pLNCX2-CREG组溶酶体数量、CD206、IL-10、SOD、CREG、Parkin、PINK1均升高,CD86、IL-1β、IL-6、CRP、ROS、MDA均降低(P<0.05);与LPS+pLNCX2-CREG组相比,LPS+pSM2-siCREG组酶体数量溶酶体数量、CD206、IL-10、SOD、CREG、Parkin、PINK1均降低,CD86、IL-1β、IL-6、CRP、ROS、MDA均升高(P<0.05)。结论过表达CREG可增强溶酶体活性,发挥抗炎、抗氧化作用,认为CREG通过激活PINK1/Parkin通路促进线粒体自噬,从而减轻LPS诱导的S-ALI。