基于AMPK/mTOR通路调控氧化应激探讨电针治疗原发性痛经大鼠的作用机制OA

目的探讨电针三阴交穴对原发性痛经(PDM)模型大鼠疼痛症状及子宫组织损伤的影响,并分析其潜在的作用机制。方法选取60只SPF级雌性SD大鼠,按随机数字表法分为空白组、模型组、假电针组、电针组和药物组,每组12只。空白组不做干预,其余4组均通过苯甲酸雌二醇联合缩宫素制备周期性PDM大鼠模型。从造模第4天起,电针组电针双侧三阴交穴,25 min/次,1次/d,持续5 d;空白组和模型组进行抓取捆绑处理,不进行干预;假电针组于双侧三阴交穴旁开2 mm处针刺,留针25 min/次,1次/d,持续5 d;药物组给予布洛芬灌胃治疗,1次/d,持续5 d。干预结束后,采用动物行为学评估法评估大鼠疼痛反应;采用HE染色法对大鼠子宫组织进行病理学变化分析;采用酶联免疫吸附试验(ELASA)法检测大鼠血清中前列腺素E_(2)(PGE_(2))、前列腺素F_(2)α(PGF_(2)α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)含量;采用二氢乙啶(DHE)免疫荧光探针活性氧(ROS)染色法检测大鼠子宫组织ROS含量;采用蛋白质印迹技术(WB)分析大鼠子宫组织中腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其磷酸化形式的表达水平。结果①行为学指标:与空白组比较,模型组、假电针组、电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数和扭体潜伏期均明显升高(P<0.05)。与模型组比较,电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数均明显更低(P<0.05),扭体潜伏期均明显更长(P<0.05)。与假电针组比较,电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数均明显更低(P<0.05),扭体潜伏期均明显更长(P<0.05)。②子宫组织病理损伤评分:与空白组比较,模型组和假电针组干预后子宫组织病理损伤评分均明显增加(P<0.05)。与模型组比较,电针组和药物组干预后子宫组织病理损伤评分均明显降低(P<0.05)。与假电针组比较,电针组和药物组干预后子宫组织病理损伤评分均明显降低(P<0.05)。③PGE_(2)、PGF_(2)α、SOD、MDA和GSH-Px含量:与空白组比较,模型组、假电针组干预后血清PGE_(2)、SOD和GSH-Px含量均明显更低(P<0.05),MDA、PGF_(2)α含量和PGF_(2)α/PGE_(2)均明显更高(P<0.05);电针组和药物组干预后PGF_(2)α含量和PGF_(2)α/PGE_(2)均明显更高(P<0.05)。与模型组比较,电针组和药物组干预后血清PGE_(2)、SOD和GSH-Px含量均明显更高(P<0.05),PGF_(2)α、MDA含量和PGF_(2)α/PGE_(2)均明显更低(P<0.05)。与假电针组比较,电针组和药物组干预后血清PGE_(2)、SOD和GSH-Px含量均明显更高(P<0.05),PGF_(2)α、MDA含量和PGF_(2)α/PGE_(2)均明显更低(P<0.05)。④ROS表达水平:与空白组比较,模型组、假电针组、电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量均明显更高(P<0.05)。与模型组比较,电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量均明显更低(P<0.05)。与假电针组比较,电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量明显更低(P<0.05)。⑤AMPK、mTOR、p-AMPK、pmTOR蛋白表达水平:与空白组比较,模型组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK明显更高(P<0.05),pmTOR/mTOR明显更低(P<0.05)。与模型组比较,电针组与药物组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK均明显更低(P<0.05),p-mTOR/mTOR均明显更高(P<0.05)。与假电针组比较,电针组和药物组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK均明显更低(P<0.05),p-mTOR/mTOR均明显更高(P<0.05)。结论电针三阴交穴可有效缓解PDM模型大鼠疼痛症状和子宫组织损伤,这可能与调控AMPK/mTOR信号通路、抑制氧化应激反应有关。