鸡原代睾丸支持细胞分离培养方法的改进与鉴定OA

为了对鸡原代睾丸支持细胞分离培养方法做出改进,用京红一号孵化至18 d的鸡胚与2、10 d的商品代雏鸡睾丸,分别通过二酶二步法、三酶二步法和联合处理法对支持细胞进行分离培养研究。分离培养不同时期睾丸支持细胞,观察细胞形态,计算细胞活率,筛选出最佳时期鸡睾丸组织。利用增加酶解消化次数和机械处理法的联合处理法,提高支持细胞的细胞活率以改进现有支持细胞的提取方法。对原代支持细胞用低渗的磷酸缓冲液进行细胞纯化,并对原代细胞传代和鉴定。结果表明,同种方法不同日龄睾丸组织支持细胞分离效果不同,10 d雏鸡平均细胞活率显著高于鸡胚和2 d雏鸡组(P<0.05),最高达94.50%。同一时期支持细胞的分离效果,三酶二步法和联合处理法消化结果存在显著差异(P<0.05),联合处理法细胞活率提高5.5%;经低渗处理后,可去除附着在支持细胞上的精原细胞,经免疫荧光鉴定支持细胞纯度可达98%;油红O染色显示支持细胞胞质内含有大量的脂肪滴。研究表明,经使用改进的联合处理法分离培养10 d雏鸡睾丸组织以及低渗处理能得到纯度较高的鸡睾丸支持细胞;免疫荧光、油红O的鉴定方法简单高效,适用于鸡睾丸支持细胞的制备与鉴定。