基于AGE/RAGE信号通路探讨半夏泻心汤改善血管性痴呆大鼠认知功能障碍的作用机制OA

目的:该研究旨在探讨半夏泻心汤(BXT)通过调控糖基化终产物/晚期糖基化终产物受体(AGE/RAGE)信号通路降低神经炎症反应,改善血管性痴呆(VD)大鼠认知功能障碍的作用机制。方法:采用超高效液相色谱-四极杆-轨道阱串联质谱(UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS)技术对BXT进行成分检测,运用网络药理学、分子对接技术筛选出核心成分与关键作用通路。60只SPF级SD雄性大鼠随机数字表法分为假手术组(Sham)、造模组,采用改良双侧颈总动脉结扎法(2-VO)复制VD模型,将造模成功的大鼠按照随机数字表法分为模型组(Model),半夏泻心汤低、中、高剂量组(BXT-L、BXT-M、BXT-H)和尼莫地平组(NMP),BXT-L、BXT-M、BXT-H分别给予BXT 3.7485、7.497、14.994 g·kg^(-1),NMP给予NMP 0.0027 g·kg^(-1),Sham、Model予等量生理盐水,连续14 d灌胃给药。Morris水迷宫、Y迷宫、新物体识别实验评估大鼠认知功能障碍。苏木素-伊红(HE)染色评估大鼠海马组织病理学变化。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠海马组织晚期AGE、RAGE、磷酸化核转录因子-κB p65(p-NF-κB p65)mRNA水平。蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组化法(IHC)检测大鼠海马组织AGE/RAGE通信通路的相关蛋白表达。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清神经递质和炎症因子。结果:UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS技术检测BXT化学成分。网络药理学、分子对接技术筛选出AGE/RAGE信号通路作为关键通路。与Sham比较,Model大鼠成功潜伏期延长,穿越平台次数、自主交替率、进入新臂次数、偏好指数、辨别指数显著降低(P<0.01);与Model比较,BXT-H、BXT-M大鼠成功潜伏期显著缩短(P<0.01)、穿越平台次数、自主交替率、进入新臂次数、偏好指数、辨别指数明显增加(P<0.05,P<0.01)。HE结果显示,与Sham比较,Model大鼠细胞排列松散杂乱,细胞核固缩。与Model比较,BXT海马组织病理损伤明显改善。Real-time PCR结果显示,与Sham比较,Model大鼠海马组织AGE、RAGE、p-NF-κB p65 mRNA显著升高(P<0.01),与Model比较,BXT-H、BXT-M大鼠AGE、RAGE、p-NF-κB p65 mRNA显著降低(P<0.01),Western blot结果显示,与Sham比较,Model大鼠AGE、RAGE、p-NF-κB p65、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达明显增加(P<0.05),与Model比较,BXT-H大鼠AGE、RAGE、p-NF-κB p65、TNF-α表达明显降低(P<0.05),IHC结果显示,与Sham比较,Model大鼠RAGE表达显著增加(P<0.01),与Model比较,BXT-H、BXT-M大鼠RAGE表达显著降低(P<0.01),ELISA结果显示,与Sham比较,Model大鼠血清TNF-α、白细胞介素-1β(IL-1β)水平显著升高,乙酰胆碱(ACh)和多巴胺(DA)水平显著降低(P<0.01),与Model比较,BXT-L各剂量组大鼠血清TNF-α、IL-1β水平明显降低(P<0.05),ACh和DA水平明显升高(P<0.05)。结论:BXT可能通过下调AGE/RAGE信号通路,减轻神经炎症反应,调节神经递质含量,从而改善VD认知功能障碍。