木犀草苷靶向结合PPARα改善小鼠代谢功能障碍相关脂肪性肝病OA

目的探讨木犀草苷(luteolin-7-O-glucoside,LUT-7G)改善代谢功能障碍相关脂肪性肝病(metabolic dysfunction-associated fatty liver disease,MAFLD)的作用机制。方法通过连续喂养小鼠高脂饮食(high fat diet,HFD)12周诱导小鼠MAFLD模型,后四周灌胃给予小鼠LUT-7G(30、60 mg/kg)干预,给药结束后检测小鼠血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)及谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)酶活力变化、血清及肝脏中甘油三酯(triglyceride,TG)、游离脂肪酸(non-esterified fatty acids,NEFA)的含量变化,通过肝脏组织HE染色、油红O染色、F4/80及Ly6G免疫组化实验观察小鼠肝脏病理变化,通过荧光定量反转录PCR(real-time quantitative reverse transcription PCR,RT-PCR)评价肝脏中炎症因子IL-6及IL-1b的基因水平变化,评价木犀草苷给药对HFD小鼠肝脏损伤、脂质堆积及炎性浸润的改善作用。采用Western印迹法检测木犀草苷体内及NEFA(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导HepaRG细胞体外脂质堆积模型中给药干预对过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorα,PPARα)蛋白核转位的影响,Western印迹法及RT-PCR检测PPARα下游参与脂肪酸氧化因子的基因水平及肉碱棕榈酰转移酶1A(carnitine palmitoyltransferase 1A,CPT1A)的蛋白水平的变化;分子对接、微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)以及细胞热位移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)研究木犀草苷与PPARα的相互作用;体外通过BODIPY荧光染色评价GW6471(PPARα抑制剂)对木犀草苷降脂作用的影响。结果LUT-7G(30、60 mg/kg)能够降低MAFLD小鼠NAFLD活动度评分(NAFLD activity score,NAS)(P<0.05),降低血清、肝脏中TG及NEFA含量(P<0.05,P<0.01,P<0.001),减少肝脏中巨噬细胞及中性粒细胞浸润,降低炎症因子IL-1b及IL-6的基因表达(P<0.05)。木犀草苷能够在体内外激活PPARα信号通路,促进其核转位,增强下游参与脂肪酸氧化相关因子的基因表达及CPT1A的蛋白表达(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。分子对接、MST及CETSA结果证实LUT-7G与PPARα存在直接结合(P<0.05)。BODIPY荧光染色结果显示LUT-7G的体外降脂作用被PPARα抑制剂GW6471逆转。结论LUT-7G通过与PPARα直接结合,激活肝脏PPARα信号通路,发挥改善HFD诱导小鼠MAFLD的作用。