miR-642a-3p通过HIF-1α/EGFR通路参与破骨细胞分化的机制研究OA

目的探讨miR-642a-3p对破骨细胞分化的影响及其机制。方法采用THP-1细胞系,经PMA(100 ng/mL)诱导24 h分化为单核巨噬细胞后,联合RANKL(50 ng/mL)和M-CSF(30 ng/mL)分别诱导3、5、8 d建立破骨细胞分化模型。通过慢病毒转染构建miR-642a-3p敲低(Sh-miR-642a-3p)细胞模型;采用骨吸收陷窝实验、TRAP染色评估破骨细胞骨吸收能力;qRT-PCR和Western印迹法检测miR-642a-3p、破骨细胞分化标志基因(NFATc1、CTSK、ACP5)、破骨细胞特异性蛋白(MMP9、NFATc1、CTSK)及通路关键分子(EGFR、HIF-1α)的表达;结合生物信息学(TargetScan、miRDB、DisGeNET数据库及GSE35958数据集)预测miR-642a-3p靶基因及调控通路。结果破骨细胞分化过程中,骨吸收陷窝面积呈时间依赖性显著增加(第8天达峰值,P<0.01)。TRAP染色显示,第8天的破骨细胞较大,数量多且胞质颜色深、破骨细胞分化标志基因mRNA及破骨细胞特异性蛋白水平呈时间依赖性上调(第8天达峰值,P<0.001),miR-642a-3p表达水平随诱导时间显著升高(第8天达峰值,P<0.05)。敲低miR-642a-3p后,骨吸收陷窝面积减少(P<0.01),破骨细胞数量明显减少(P<0.01),破骨细胞分化标志基因及破骨细胞特异性蛋白表达均显著下调(P<0.05)。生物信息学分析显示,miR-642a-3p调控HIF-1α通路,其中EGFR是骨质疏松差异表达关键基因(P<0.05)。qRT-PCR和Western印迹法结果显示,EGFR、HIF-1α在破骨细胞分化过程中表达上调,而敲低miR-642a-3p后两者表达同步抑制(P<0.05)。结论miR-642a-3p通过激活HIF-1α/EGFR信号通路促进破骨细胞分化,可能成为绝经后骨质疏松症的潜在治疗靶点。