基于SIRT1/FOXO1信号通路探讨白藜芦醇减轻氧糖剥夺/再灌注诱导原代皮层神经元损伤的作用机制OA

目的 基于沉默调节蛋白1/叉头框蛋白O1(SIRT1/FOXO1)信号通路,探讨白藜芦醇(Res)减轻氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导原代皮层神经元损伤的作用机制。方法 体外培养原代皮层神经元,构建氧糖剥夺(OGD/R)模型,加入不同浓度Res干预后用CCK-8法检测神经元存活率,筛选Res最佳实验浓度。取OGD/R神经元模型,随机分为OGD/R组、OGD/R+Res组、OGD/R+Res+SIRT1抑制剂组(OGD/R+Res+EX527组),并取部分正常细胞作为对照组(Norm组)。OGD/R+Res组加入最佳实验浓度Res、OGD/R+Res+EX527组加入最佳实验浓度Res+25μmol/L的EX527,培养24 h。CCK-8法检测皮层神经元存活率,用实时荧光定量PCR法检测SIRT1、自噬相关基因微管相关蛋白轻链3(LC3)mRNA表达,用Western blotting法检测SIRT1/FOXO1信号通路相关蛋白及自噬相关标志蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、p62表达,用免疫荧光染色法检测自噬体形成情况(LC3阳性细胞)。结果 根据神经元存活率选用20μmol/L作为Res的最佳实验浓度。与Norm组比较,OGD/R组SIRT1、LC3 mRNA表达高,但差异无统计学意义(P均>0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+Res组SIRT1、LC3 mRNA表达高(P均<0.05);与OGD/R+Res组比较,OGD/R+Res+EX527组SIRT1、LC3 mRNA表达低(P均<0.05)。与Norm组比较,OGD/R组SIRT1、FOXO1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高,而p62蛋白表达低(P均<0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+Res组SIRT1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ高,而FOXO1、p62蛋白表达低(P均<0.05);与OGD/R+Res组比较,OGD/R+Res+EX527组SIRT1蛋白表达及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ低,而FOXO1、p62蛋白表达高(P均<0.05)。与Norm组比较,OGD/R组LC3阳性细胞比例高(P<0.05);与OGD/R组比较,OGD/R+Res组LC3阳性细胞比例高(P<0.05);与OGD/R+Res组比较,OGD/R+Res+EX527组LC3阳性细胞比例低(P<0.05)。结论 Res可能通过激活SIRT1/FOXO1信号通路,促进自噬,从而减轻OGD/R诱导的原代皮层神经元损伤。