基于ACSL4/SLC7A11/GPX4通路探讨解毒祛瘀滋阴方抑制铁死亡治疗狼疮性肾炎的作用机制OA

[目的]探讨解毒祛瘀滋阴方通过抑制肾脏铁死亡治疗狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)的作用机制。[方法]18只雌性MRL/lpr狼疮小鼠随机分为模型组、激素组(5 mg·kg^(-1))和解毒祛瘀滋阴方组(18.2 g·kg^(-1));6只MRL/MpJ小鼠作为正常组,连续干预8周。干预结束后,计算各组小鼠脾脏和淋巴结指数;检测血清BUN、Cr、尿微量白蛋白(urine albumin,U-ALB)以及尿总蛋白(urine total protein,UTP)水平;ELISA法检测抗双链DNA(double-stranded DNA,dsDNA)抗体、抗核抗体(anti-nuclear antibody,ANA)、IL-17A、IL-6、IL-10水平;HE染色、免疫组化和免疫荧光法观察肾脏病理形态学变化;透射电镜观察肾脏皮质和髓质的线粒体超微结构;免疫印迹法和RT-qPCR分别检测小鼠肾脏中长链酰基辅酶A合成酶4(long-chain acyl-CoA synthetase 4,ACSL4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 members 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)蛋白及mRNA的表达。以肾小管上皮细胞(renal tubular epithelial cells,RTECs)为研究对象,均加入脂质活性氧生成剂叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide,TBHP),来源于MRL/lpr小鼠的RTECs加入解毒祛瘀滋阴方含药血清和甲泼尼龙悬液进行干预,检测各组细胞内脂质过氧化、活性氧(reactive oxygen species,ROS)和Fe^(2+)水平,免疫印迹法检测皮质RTECs的铁死亡相关蛋白水平。[结果]与模型组比较,各治疗组小鼠脾脏和淋巴结肿大显著缓解(P<0.05,P<0.01);血清BUN、Cr、抗dsDNA抗体、ANA、IL-17A、IL-6、IL-10、U-ALB、UTP水平显著降低(P<0.05,P<0.01);肾脏线粒体损伤明显减轻、炎症细胞浸润减少,补体C3和IgG沉积明显减少(P<0.01)。解毒祛瘀滋阴方治疗后肾脏ACSL4蛋白及mRNA表达均下降,SLC7A11蛋白及mRNA和GPX4 mRNA表达均升高(P<0.05,P<0.01)。体外实验提示,MRL/lpr小鼠肾皮质RTECs的脂质过氧化、ROS水平和Fe^(2+)水平显著高于正常小鼠(P<0.05,P<0.01),TBHP处理后差异更加明显(P<0.05,P<0.01)。解毒祛瘀滋阴方能够降低细胞内脂质过氧化和ROS水平,减少铁积累,抑制ACSL4的表达,增加SLC7A11和GPX4的表达(P<0.05,P<0.01)。[结论]解毒祛瘀滋阴方通过调控ACSL4/SLC7A11/GPX4通路干预铁死亡,减轻肾脏RTECs的氧化损伤,提高抗氧化能力,从而缓解LN的肾脏损害。