lncRNA MEG3基因表观遗传学对巨噬细胞脂质代谢的干预机制研究OA

目的基于巨噬细胞模型观察长链非编码RNA母系表达基因3(lncRNA MEG3)与微小RNA(miR)-642a-5p对甘油三酯(TG)生成限速酶脂蛋白脂酶(LPL)的影响,并从基因表观遗传学水平探讨降低TG抗动脉粥样硬化(AS)的细化作用机制。方法采用50 mg/L氧化修饰的低密度脂蛋白(ox-LDL)制备人单核白血病细胞(THP-1)模型,给予不同转染干预。采用实时定量聚合酶链反应(qRCR)法检测lncRNA MEG3、miR-642a-5p、血管生成素样蛋白4(ANGPTL_(4))、LPL的基因表达;采用蛋白免疫印迹(WB)法检测ANGPTL_(4)、LPL的蛋白表达;采用油红染色观察带有红色脂滴颗粒细胞数目(代表细胞脂质沉积)。结果①在ox-LDL暴露的THP-1细胞模型中,lncRNA MEG3高表达,miR-642a-5p低表达,ANGPTL_(4)高表达,LPL低表达,带有红色脂滴颗粒细胞数目高表达,差异均有统计学意义(P<0.01)。②lncRNA MEG3与miR-642a-5p基因相对表达水平呈负相关(r=-0.7649,P=0.045),miR-642a-5p与ANGPTL_(4)基因相对表达水平呈负相关(r=-0.9765,P=0.0012),ANGPTL_(4)与LPL蛋白相对表达水平呈负相关(r=-0.9293,P=0.0025),ANGPTL_(4)与带有红色脂滴颗粒细胞数目呈正相关(r=0.8971,P=0.025)。③上调miR-642a-5p,ANGPTL_(4)蛋白及基因相对表达水平降低,LPL蛋白及基因相对表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.01);下调miR-642a-5p,ANGPTL_(4)蛋白及基因相对表达水平增加,LPL蛋白及基因相对表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。④敲除lncRNA MEG3,ANGPTL_(4)蛋白及基因相对表达水平降低,miR-642a-5p基因、LPL蛋白及基因相对表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.01)。⑤敲除lncRNA MEG3且上调miR-642a-5p,miR-642a-5p基因、LPL基因及其蛋白相对表达水平增加,ANGPTL_(4)基因及其蛋白相对表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01);敲除lncRNA MEG3且下调miR-642a-5p,miR-642a-5p基因、LPL基因及其蛋白相对表达水平降低,ANGPTL_(4)基因及其蛋白相对表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论ANGPTL_(4)抑制LPL成为促进脂质沉积新的炎症因子,miR-642a-5p通过靶向抑制ANGPTL_(4)基因表达,减少巨噬细胞脂质沉积,而lncRNA MEG3可能作为竞争性内源RNA,通过“海绵吸附效应”抑制miR-642a-5p使下游ANGPTL_(4)基因转录表达增加,抑制LPL促进TG生成。