桂枝茯苓胶囊通过调控MYC/WWP1增强卵巢癌荷瘤裸鼠对顺铂敏感性OA

目的:探讨桂枝茯苓胶囊(Guizhi-Fuling capsule,GFC)对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤抑制作用和机制。方法:建立SKOV3/DDP裸鼠移植瘤模型,随机分为模型对照组、GFC低、高剂量组(每日灌胃1次)、顺铂组、顺铂联用GFC低剂量组及染色体外环状DNA(extrachromosomal circular DNA,ecDNA)抑制剂羟基脲组及MYC/WWP1抑制剂MYCi975组,每组9只。顺铂、羟基脲和MYCi975均隔日腹腔注射1次。连续用药2周后处死裸鼠,称量体重并剥离肿瘤称重,计算抑瘤率。采用免疫荧光法检测肿瘤组织Ki67表达,RT-qPCR和Western blot检测瘤组织内MYC、含WW结构域E3泛素蛋白连接酶1(WW domain-containing E3 ubiquitin protein ligase 1,WWP1)、磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)和N-钙黏蛋白(N-cadherin,CDH2)表达,数字PCR检测瘤组织WWP1-ecDNA表达,基于转座酶的染色质可及性高通量测序(assay for transposase-accessible chromatin with high throughput sequencing,ATAC-seq)技术检测染色质开放区域基因可及性。结果:SKOV3/DDP荷瘤裸鼠模型中,顺铂组、羟基脲组和MYCi975组裸鼠体重显著下降(P<0.05或P<0.01),而GFC联合顺铂组则能够显著缓解裸鼠体重的下降趋势(P<0.05)。GFC联用顺铂的肿瘤抑制作用强于顺铂单用(P<0.05)。各组SKOV3/DDP荷瘤裸鼠肿瘤增殖指标Ki67的变化趋势与肿瘤生长趋势一致。与对照组相比,顺铂给药后瘤组织MYC、WWP1和CDH2 mRNA和蛋白表达以及WWP1-ecDNA增高,PTEN mRNA和蛋白表达下降(P<0.05或P<0.01)。GFC单用或联用顺铂后,肿瘤组织MYC、WWP1和CDH2 mRNA和蛋白表达、WWP1-ecDNA下降,PTEN mRNA和蛋白表达增高(P<0.05或P<0.01),染色质开放区域WWP1、CDH2基因可及性减弱,PTEN基因可及性增强。GFC高剂量组抑制WWP1、MYC和CDH2 mRNA和蛋白的作用与MYCi975无显著性差异,但对PTEN mRNA的诱导作用弱于MYCi975组(P<0.05),抑制WWP1-ecDNA的作用强于羟基脲组(P<0.05)。结论:GFC联用顺铂可增强对SKOV3/DDP荷瘤裸鼠移植瘤的抑制作用,其机制可能与调控MYC、WWP1、PTEN、CDH2和WWP1-ecDNA有关。