不同诱导方式构建的IBS-D小鼠模型肠神经病理改变的比较研究OA

目的:探究束缚应激法(wrap restraint stress,WRS)、三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)化学刺激法和WRS+TNBS三种构建小鼠腹泻型肠易激综合征(irritable bowel syndrome with diarrhea,IBS-D)模型方法对小鼠肠神经系统的影响。方法:选取24只SPF级35~42日龄雄性C57BL/6小鼠,按照随机对照原则分为4组,分别为对照(control)组、WRS组、TNBS组和TNBS+WRS组,每组6只。WRS组每日使用医用胶带包裹小鼠上前肢和胸干并将小鼠置于50 mL离心管中2 h,连续9 d;TNBS组麻醉条件下以0.1 mL TNBS灌肠1次;TNBS+WRS组在麻醉条件下TNBS一次性灌肠刺激后,连续9 d内,每天行束缚应激2 h。通过测算粪便含水量、内脏敏感性检测和HE染色对IBS-D的严重程度进行比较;通过旷场实验、糖水偏好实验和避水应激实验评估小鼠情志;通过电镜观察肠神经细胞超微结构;通过ELISA测定结肠5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)水平,Western blot检测蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)及原癌基因蛋白c-Fos表达评估不同建模方法对小鼠结肠神经元的影响。结果:(1)与control组相比,三个模型组粪便含水量均显著升高(P<0.05,P<0.01);各模型组腹部撤回反射评分均显著升高(P<0.05),且TNBS+WRS联合模型组的评分升高尤为显著(P<0.01);同时HE染色结果显示各模型组结肠上皮无明显细胞炎症或细胞损伤,结肠浆膜层无水肿、糜烂和溃疡。(2)电镜结果显示,与control组相比,三个模型组神经元出现线粒体肿胀、嵴溶解甚至线粒体破裂。(3)与control组相比,三个模型组结肠5-HT水平均显著升高(P<0.05),且TNBS+WRS模型组升高最为显著(P<0.01)。(4)与control组相比,WRS和TNBS+WRS模型组神经元标志物PGP9.5表达显著降低,神经元活化标志c-Fos表达升高(P<0.05),且TNBS+WRS组的差异性更显著(P<0.01)。结论:三种IBS-D小鼠(TNBS、WRS及TNBS+WRS)模型均能有效模拟IBS-D的疾病状态,且均在肠神经系统方面表现出不同程度的变化,其中TNBS联合WRS的复合模型在肠神经元损伤的变化最明显。