具有内耳治疗潜力的外泌体提取及标记研究OA

目的 分离提取和标记用于内耳治疗的外泌体。方法 原代培养人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cell,HUC-MSCs),使用超速离心法分离细胞上清外泌体,获得人脐带间充质干细胞外泌体(human umbilical cord mesenchymal stem cell derived exosomes,HUC-MSCs-exos),并对其进行荧光标记,最后进行HUC-MSCs-exos电镜、粒径、免疫蛋白印迹检测、RNA提取和表面蛋白阳性率检测。结果 提取的HUC-MSCs-exos边界清晰、球形、大小均一;纳米流式结果HUC-MSCs-exos颗粒浓度2.22×10^(10) Particles/mL,粒径大小81.97 nm;双辛可宁酸法测定HUC-MSCs-exos蛋白浓度0.36μg/μL;HUC-MSCs-exos有特征性膜蛋白TSG101、CD9、CD81、CD63和Syntenin表达;HUC-MSCs-exos的RNA浓度测定为1.5 ng/µL。结论 该实验方法可以成功提取用于内耳治疗的HUC-MSCs-exos。