用于细胞三维培养的即用型海藻酸钠@纸材料OA

背景:CiGiP是一种使用水凝胶将细胞封装在纸纤维中的三维培养技术,为细胞三维培养发展提供了一个良好的思路,但是水凝胶需要提前制备后再添加到纸材料上,缺乏一定的便捷性,阻碍了CiGiP的广泛应用。目的:制备一种即用型海藻酸钠@纸材料,分析该材料在细胞三维培养中的应用。方法:(1)将2%海藻酸钠溶液滴加到滤纸上,使其均匀渗透在纸材料中,得到现配现用海藻酸钠@纸材料。在现配现用海藻酸钠@纸材料上滴加1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺混合液,再分别滴加不同浓度(5%,10%,15%,20%)的聚乙二醇-二胺,冷冻干燥后得到即用型海藻酸钠@纸材料。通过溶胀率筛选出15%聚乙二醇-二胺用于制备后续即用型海藻酸钠@纸材料。(2)将人胚胎肾细胞HEK 293培养于即用型海藻酸钠@纸材料中,以二维培养的细胞为对照,通过乳酸脱氢酶释放检测评估即用型海藻酸钠@纸材料的细胞毒性。将SYTOTM9绿色荧光核酸染料标记的HEK293细胞分别培养于即用型海藻酸钠@纸材料、现配现用海藻酸钠@纸材料中,在激光共聚焦显微镜、扫描电镜下观察细胞黏附情况。(3)将即用型海藻酸钠@纸材料置于干净的培养皿中室温储存0,40,80,120 d,检测材料微观形貌、化学结构与孔隙率变化。HEK 293细胞分别培养于储存0,40,80,120 d后的即用型海藻酸钠@纸材料中,通过乳酸脱氢酶释放检测评估即用型海藻酸钠@纸材料的细胞毒性。将SYTOTM9绿色荧光核酸染料标记的HEK293细胞分别培养于储存0,40,80,120 d后的即用型海藻酸钠@纸材料中,激光共聚焦显微镜下观察细胞黏附情况。结果与结论:(1)乳酸脱氢酶释放检测显示即用型海藻酸钠@纸材料无细胞毒性。激光共聚焦显微镜显示HEK 293细胞均匀黏附在两组材料上,两组材料的细胞黏附效果无明显差异;扫描电镜下可见HEK 293细胞在两组材料中维持细胞间的相互作用,两组间无明显差异。(2)储存120 d后,即用型海藻酸钠@纸材料中的海藻酸钠水凝胶没有从纸纤维上脱落,孔隙率未见明显变化。乳酸脱氢酶释放检测显示,储存40,80,120 d后的即用型海藻酸钠@纸材料无细胞毒性。激光共聚焦显微镜显示,HEK 293细胞均匀黏附在储存40,80,120 d后的即用型海藻酸钠@纸材料上,与在未储存即用型海藻酸钠@纸材料上的黏附效果无明显差异。以上结果说明即用型海藻酸钠@纸材料具有良好的稳定性。