基于RIP1/RIP3/MLKL信号通路探讨大黄酚治疗急性脑缺血再灌注的作用机制OA

目的基于受体相互作用蛋白激酶(RIP)1/RIP3/混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)信号通路,探讨大黄酚治疗急性脑缺血再灌注(CIRI)的作用机制。方法将72只大鼠随机分为假手术组、CIRI模型组、50μg/kg大黄酚组、100μg/kg大黄酚组、150μg/kg大黄酚组、150μg/kg大黄酚+8μg/kg RIP1组,每组12只。除假手术组外,其余组均采用动脉栓塞法建立CIRI模型,给予各剂量大黄酚组大鼠腹腔注射相应浓度大黄酚干预,给予150μg/kg大黄酚+8μg/kg RIP1组大鼠依次腹腔注射大黄酚、尾静脉注射RIP1,给予假手术组和CIRI模型组大鼠腹腔注射等量生理盐水干预,连续干预14 d。于首次腹腔注射前、末次腹腔注射后,采用Longa评分评估各组大鼠脑神经损伤情况。末次腹腔注射后,取各组大鼠脑组织,采用氯化三苯四氮唑染色评估大鼠脑梗死情况,采用HE染色评估大鼠脑组织病理形态学改变,采用TUNEL染色观察大鼠脑组织神经元细胞凋亡情况,采用实时定量PCR测定大鼠脑组织Caspase-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的mRNA相对表达水平,采用Western blot检测大鼠脑组织RIP1、RIP3、磷酸化MLKL(p-MLKL)和MLKL蛋白表达水平。结果末次腹腔注射后,与假手术组相比,CIRI模型组大鼠Longa评分、脑梗死面积、神经元细胞凋亡率增加,脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA表达水平上调,RIP1、RIP3蛋白表达水平和p-MLKL/MLKL值升高,Caspase-8 mRNA表达水平降低(P<0.05);大鼠脑组织神经元细胞出现变形坏死并附着大量炎症细胞。与CIRI模型组相比,50μg/kg大黄酚组、100μg/kg大黄酚组和150μg/kg大黄酚组大鼠Longa评分、脑梗死面积、神经元细胞凋亡率降低/减小,脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平下调,RIP1、RIP3蛋白表达水平和p-MLKL/MLKL值降低,Caspase-8 mRNA表达水平升高(P<0.05);大鼠脑组织结构完整,神经元细胞排列整齐,仅有少量炎症细胞存在。与150μg/kg大黄酚组相比,150μg/kg大黄酚+8μg/kg RIP1组大鼠Longa评分、脑梗死面积、神经元细胞凋亡率增加,脑组织TNF-α、IL-1β和IL-6 mRNA表达水平上调,RIP1、RIP3蛋白表达水平和p-MLKL/MLKL值升高,Caspase-8 mRNA表达水平降低(P<0.05);大鼠脑组织神经元细胞排列疏松且有空泡变形,炎症细胞浸润明显。结论大黄酚可能通过抑制RIP1/RIP3/MLKL信号通路,减轻急性CIRI大鼠模型脑组织炎症反应,抑制神经元凋亡,保护受损神经元。