小胶质细胞TRPV1在载脂蛋白E4相关帕金森病中的作用OA

目的·探讨小胶质细胞瞬时受体电位香草酸亚型1(transient receptor potential vanilloid 1,TRPV1)对载脂蛋白E4(apolipoprotein E4,ApoE4)相关帕金森病(Parkinson''s disease,PD)病理进程的调控作用。方法·繁育APOE3/Trpv1^(flox/flox)(E3/Trpv1^(fl/fl))、APOE4/Trpv1^(flox/flox)(E4/Trpv1^(fl/fl))和小胶质细胞特异性Trpv1敲除的Cx3cr1^(Cre)(E4/Trpv1^(MGKO))小鼠,在上述小鼠黑质致密部(substantia nigra pars compacta,SNpc)注射人A53Tα-突触核蛋白(AAV-hα-syn)。同样方法在E3/Trpv1^(fl/fl)小鼠的SNpc注射AAV-GFP(green fluorescent protein)作为对照。注射30 d后,采用旷场实验、牵引力实验、爬杆实验、转棒实验和悬尾实验分析小鼠的运动协调能力和肌肉耐力,采用莫里斯水迷宫实验检测小鼠的空间学习与记忆能力。采用免疫荧光技术,使用酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)和磷酸化Ser129α-突触核蛋白[p-α-syn(Ser129)]抗体检测小鼠SNpc多巴胺能神经元存活和病理性α-syn沉积情况,使用离子钙结合接头分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)和p-α-syn(Ser129)抗体检测小鼠中脑小胶质细胞的吞噬功能,并采用BODIPY 493/503染色观察小胶质细胞、神经元和星形胶质细胞中脂滴积聚情况。结果·牵引力测试结果显示,E4/Trpv1^(MGKO)(AAV-hα-syn)小鼠与E4/Trpv1^(fl/fl)(AAV-hα-syn)小鼠相比握力无差异;但其在旷场中的平均速度和行进距离增加,爬杆实验的翻转所需时间(t_(turn))及下降时间(t_(LA))显著延长,转棒实验的停留潜伏期缩短,悬尾实验中表现出更强的张力障碍姿势,显示出E4/Trpv1^(MGKO)小鼠运动功能障碍加重;莫里斯水迷宫实验中E4/Trpv1^(MGKO)小鼠逃避潜伏期明显延长,在目标象限行进距离占比减少,显示小胶质细胞TRPV1缺失显著影响ApoE4相关PD小鼠的空间学习能力。免疫荧光检测显示,E4/Trpv1^(MGKO)(AAV-hα-syn)小鼠SNpc多巴胺能神经元丧失加剧,p-α-syn沉积增多。并且其中脑小胶质细胞吞噬能力增强,脂滴积累增加,但小胶质细胞TRPV1缺失并未加剧小鼠星形胶质细胞和神经元中的脂滴积累。结论·小胶质细胞TRPV1缺失加速了ApoE4介导的PD病理进程,破坏了小胶质细胞的脂质代谢稳态。