八珍荔核抗纤方调控NLRP3/GSDMD信号通路介导细胞焦亡对HSC-T6细胞的作用机制OA

目的:探讨八珍荔核抗纤方是否可通过调控核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)/焦孔素D(GSDMD)信号通路介导细胞焦亡影响肝纤维化的进程。方法:将大鼠随机分为空白组及八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组,空白组以生理盐水灌胃,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组分别按照0.796 g/mL、1.593 g/mL、3.186 g/mL以生理盐水配八珍荔核抗纤方颗粒进行灌胃,以制备空白血清及八珍荔核抗纤方不同剂量含药血清。通过CCK8法测定不同剂量的八珍荔核抗纤方含药血清对rh TGF-β1激活的HSC-T6细胞的影响。透射电镜观察各组细胞形态。ELISA检测细胞上清液中IL-1β和IL-18含量。采用蛋白印迹(Western blotting)法和RT-qPCR检测HSC-T6细胞中NLRP3、GSDMD和CASPASE-1蛋白的表达及mRNA的表达。结果:CCK8结果显示,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组均能抑制经rhTGF-β1处理的HSC-T6细胞的增殖(P<0.05),随着八珍荔核抗纤方剂量的增加,抑制增殖作用越明显,且48 h较24 h效果更佳(P<0.05)。透射电镜结果发现,与空白组比较,模型组及八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组细胞均有不同程度的细胞肿胀膨大,细胞质膜破裂,细胞膜穿孔。与模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组细胞肿胀程度改善,细胞膜穿孔减少。ELISA结果显示,与空白组比较,模型组中的IL-1β、IL-18含量增加(P<0.05);与模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组中的IL-1β、IL-18含量均减少(P<0.05),呈浓度依赖性降低。Western blotting结果表明,与空白组比较,模型组中的IL-1β、IL-18含量增加(P<0.05);与模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组中的IL-1β、IL-18含量均减少(P<0.05),呈浓度依赖性降低。RT-qPCR结果显示,与空白组比较,细胞模型组的NLRP3 mRNA、GSDMD mRNA、CASPASE-1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05);八珍荔核抗纤方处理后,与细胞模型组比较,八珍荔核抗纤方低、中、高剂量组NLRP3 mRNA、GSDMD mRNA、CASPASE-1 mRNA表达水平显著下调,其中八珍荔核抗纤方高剂量组下调最明显,且呈剂量依赖性降低(P<0.05)。结论:八珍荔核抗纤方可能通过NLRP3/GSDMD信号通路,下调NLRP3、GSDMD、CASPASE-1的蛋白表达及mRNA表达,减少细胞焦亡,抑制HSC-T6细胞增殖活化,降低炎症反应。